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ADN LIGASE 2 x LIGATION UNIVERSELLE Mélange avec le réactif de biologie moléculaire de la LIGASE T4 ADN et de la mémoire tampon

Spécification: 100t
  • G3341-100
  • Servicebio
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Description du produit

G3341-100

La description:

2 × Universal LIGATION MIX est une prémélange prête à utiliser 2 × Premix contenant du tampon de la LIGASE et de la réaction T4 DNA. L'ADN T4 de la LIGASE contenue peut catalyser les 5'-P et 3endre des extrémités collantes ou un ADN à double échouement à double échouement émoussé. Les extrémités -OH sont combinées avec des liaisons phosphodiester. et peut réparer des pseudiers à une seule brin dans des chaînes hybrides ADN à double échouement, ARN et ADN / ARN. Le tampon de réaction prémunéré optimisé rend la réaction plus efficace et pratique à gérer. Le système de réaction peut transformer une variété de cellules chimiquement compétentes après avoir réagi à 25 ° C pendant 5 minutes.

Stockage et transport

Transport avec glace humide; Stockage à -20 ° C, valable 12 mois.

Composant

G3341-50

G3341-100

2 × mélange de ligature universelle

250 μL

2 × 250 μl

Système de connexion (système de réaction de 10 μL recommandé)

Composant

Le volume

2 × mélange de ligature universelle

5 μL

Vecteur

X μl

Segment d'ADN

Y μL

Eau sans nucléase

Ajouter à 10 μL

Conditions de réaction de la ligature

La réaction de ligature de l'extrémité collante à 25 ° C est de 5-30 minutes et la réaction de ligature de l'extrémité émoussée à 25 ° C ne dépasse pas 2 heures ou la réaction à 4 ° C pendant la nuit.

Conversion de produits de ligature

1. Retirez les cellules compétentes (telles que E.Coli DH5α, E.Coli TOP10, etc.) du réfrigérateur à -80 ° C et les décongelez sur la glace;

2. Ajoutez l'échantillon réagi à l'état compétent, déplacez doucement le fond du tube avec vos doigts pour bien mélanger, ainsi que le bain de glace pendant 30 minutes;

3. Le produit est ensuite placé dans un bain d'eau de 42 ° C pendant 90 s sur le choc thermique et, après cela, il est rapidement placé sur la glace pendant 2 à 5 min;

4. Prenez 900 μl de support soc ou lb stérile et ajoutez-le au tube EP. Après mélange, placez le tube EP sur un agitateur et incubez à 220 tr / min à 37 ° C pendant 1 heure pour récupérer les bactéries (il peut également être placé dans un incubateur de 37 ° C pour une culture de lieu statique pendant 1 heure);

5. Selon les exigences expérimentales, dessinez différents volumes de cellules compétentes transformées et ajoutez-les au milieu solide LB contenant les antibiotiques correspondants, étalez les cellules uniformément et, après que le liquide est complètement absorbé, placez la plaque à l'envers dans un 37 ° C. incubateur et cultivez la nuit.

Identification des clones positifs

Les colonies monoclonales cultivées sur la plaque sont cueillies pour l'identification de la PCR de colonie ou après la culture, le plasmide est extraite par la digestion de restriction ou l'identification de la PCR, ou le plasmide extrait est directement séquencé et analysé pour l'identification.

Précautions

1. Il est recommandé de configurer le système de réaction sur la glace.

2. Les fragments de vecteur et de cible doivent être purifiés et électrophoreses de gel pour détecter leur qualité et leur concentration. Lorsque la concentration est faible, vous pouvez les utiliser directement pour compenser sans ajouter de l'eau. Lorsque le volume total du vecteur et de l'insert est supérieur à 5 μL, le système de réaction peut être amplifié à 20 μl.

3. Il est recommandé que le rapport molaire de vecteur à insertion est de 1: 3 ~ 1: 10.

4. Lorsque l'électroporation est utilisée pour la transformation, le produit de la ligature doit être purifié par méthode de colonne ou méthode de précipitation à l'éthanol.

5. 2 × Le mélange de ligature universelle est recommandé d'être extrait lorsqu'il est utilisé et immédiatement renvoyé à -20 ° C après utilisation. Après décongélation, il peut être emballé et congelé pour réduire le nombre de cycles répétés de congélation.

6. Lors de la connexion d'un vecteur extrêté sur un fragment d'ADN, le vecteur doit être déphosphorysé (G3400 recommandé) pour empêcher sa circulation de soi.

7. Veuillez porter des vêtements de laboratoire et des gants jetables pendant le fonctionnement.

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