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Annexe V-IF647 / Kit de détection de l'apoptose de la cellule PI Cell

Volume: 50t
  • G1514-50T
  • Servicebio
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Description du produit

Information produit:

Nom du produit

Chat. Non.

Le volume

Annexe V-IF647 / Kit de détection de l'apoptose de la cellule PI Cell

G1514-50T

50t

G1514-100T

100t

Description du produit:

L'apoptose est un processus physiologique normal qui se produit dans le processus de développement embryonnaire et de maintenance des homéostases tissulaires. Il est accompagné de nombreux changements morphologiques. Parmi eux, la perte de la membrane cellulaire est l'une des premières caractéristiques de l'apoptose. Dans des cellules normales, la phosphotidylserine (PS) n'est distribuée que sur le côté intérieur de la bicouche phospholipide de la membrane cellulaire, mais au stade précoce de l'apoptose, PS se retournera du côté intérieur de la membrane lipide au côté extérieur, l'exposant à l'extérieur de la cellule. ANNEXIN V (ANNEXIN V) est une protéine de liaison à la phospholipide de CA2 + -Dépendante avec une affinité élevée pour PS et se lie spécifiquement aux cellules exposées à PS. Par conséquent, l'annexe V est utilisée comme l'un des indicateurs de détection de l'apoptose de la cellule précoce. L'iodure de propidium (PI) est un colorant d'acide nucléique. Il ne peut pas pénétrer des cellules normales avec des membranes cellulaires intactes et des cellules apoptotiques précoces, mais peut pénétrer les membranes cellulaires des cellules apoptotiques et nécrotiques tardives et tacher le noyau.

Ce produit utilise la molécule de colorant fluorescente IF647 étiquetée annexine V comme une sonde de détection pour détecter l'apoptose de la cellule précoce. Dans le même temps, PI est utilisé pour distinguer les cellules survivantes des cellules nécrotiques et des cellules apoptotiques tardifs. Utilisation combinée de l'annexe V-IF647 et de PI, des cellules vivantes montrent des taches négatives (annexine V- / PI-), les cellules apoptotiques précoes montrent que la fluorescence unique positive (annexe V + / PI-) et des cellules anticoptotiques fines et des cellules nécrotiques montrent une double fluorescence positive. (Annexe V + / PI +). Ce kit convient à la cytométrie de flux ou à la détection de microscope à fluorescence.

Stockage et transport

Transport dans la glace humide; Conserver à 2-8 ° C dans le noir, valable 12 mois.

Composant:

Numéro de composant

Composant

G1514-50T

G1514-100T

G1514-1

Annexe V-If647

250 μL

2 × 250 μl

G1514-2

Iodure de propidium (PI)

250 μL

2 × 250 μl

G1514-3

1 × tampon de liaison

25 ml

2 × 25 ml

Manuel de l'utilisateur du produit

1 pc

Étapes d'opération:

1. Cellules suspendues: Prenez la suspension cellulaire et ramassez les cellules par centrifugation à 500 g pendant 5 min à 4 ° C;

Cellules adhérentes: Collectez d'abord le surnageant de la culture cellulaire. Après la digestion avec la trypsine sans EDTA (G4002 recommandée), se combinent avec le surnageant de la culture cellulaire et collectez les cellules par centrifugation à 500 g pendant 5 min à 4 ° C. Le temps de digestion de la trypsine ne doit pas être trop long, afin d'éviter une digestion excessive et de causer de faux positifs.

2. Lavez les cellules deux fois avec du PBS pré-refroidi (G4202 recommandé) et collectez les cellules par centrifugation à 500 g à chaque fois pendant 5 min à 4 ° C;

3. remise en douceur des cellules dans le tampon de liaison pré-refroidi 1 × et ajuster la concentration de cellule à 1 ~ 5 × 106 / ml;

4. Prenez 100 μL de suspension cellulaire, ajoutez 5 μL annexine V-IF647 et 5 μL PI, mélangez doucement et protégez de la lumière à la température ambiante pendant 8 à 10 min;

5. Ajoutez 400 μl de tampon de liaison pré-fraisé 1 × partes, agitez doucement et effectuez la détection avec un cytomètre à flux ou un microscope à fluorescence dans un rayon de 1 h.

Analyse des résultats

1. Cytométrie de flux

une. Sélectionnez la tension appropriée et ajustez la compensation de la lumière pendant la détection et l'analyse de cytométrie de flux. Il est recommandé de configurer un contrôle négatif (sans marqueur) pour régler la tension et la commande d'étiquettes unique (seule l'annexe V-IF647 et l'annexe V-si647 sont ajoutées) à l'exception du groupe expérimental. Ajouter uniquement PI) pour le réglage et la compensation;

b. Exemples de référence pour la détection et l'analyse de cytométrie de flux:

Les cellules de lymphome T Jurkat ont été induites avec une camptothecine de 5 μm pendant 6 h. Reportez-vous à la procédure expérimentale ci-dessus et utilisez la cytométrie de flux pour détecter les résultats. Les résultats sont présentés dans la figure ci-dessous.

La longueur d'onde d'excitation maximale de l'IF647 est de 656 nm et la longueur d'onde d'émission maximale est de 670 nm; La longueur d'onde d'excitation maximale du complexe PI-ADN est de 535 nm et la longueur d'onde d'émission maximale est de 615 nm. Le diagramme de points à deux dispersion est tiré par le logiciel d'analyse correspondant du cytomètre de flux et l'IF647 est sur l'abscisse et le PI est sur l'ordonnée. Dans une expérience typique, les cellules vivantes n'ont pas de fluorescence et les points dispersés sont dans le premier quadrant de la gauche inférieure gauche. Les cellules apoptotiques au stade précoce ont une forte fluorescence rose et les points éparpillés sont situés dans le deuxième quadrant du bas à droite. Les cellules apoptotiques tardives et les cellules nécrotiques présentent une double fluorescence rose et rouge, et les points diffusés sont situés dans le troisième quadrant du haut droit.

2. Inspection du microscope de fluorescence

Ajoutez 6 μL ANNEXINE V-IF647 et Pi Suspension de cellules à double teinture sur la glissière en verre, couvrez-la avec un verre de couvercle et observent sous un microscope à fluorescence avec un filtre à deux couleurs. L'annexe V-IF647 a un signal de fluorescence rose et Pi est le signal de fluorescence rouge.

Remarques:

1. Pendant toute l'expérience, l'opération devrait être aussi douce que possible pour éviter la casse des cellules et affecter les résultats expérimentaux.

2. Le lavage des cellules avec PBS ne peut pas être omis, et en même temps, retirez le PBS résiduel autant que possible.

3. Lorsque vous utilisez la trypsine pour digérer les cellules, vous devez veiller à éviter les dommages artificiels des cellules et à contrôler le temps de digestion. Si le temps de digestion est trop court, les cellules doivent être soufflées pour tomber, ce qui est susceptible de causer des dommages mécaniques à la membrane cellulaire; Si le temps de digestion est trop long, la membrane cellulaire est également vulnérable aux dommages. Affecter les résultats du test. De plus, la pancréatine contenant EDTA ne peut pas être utilisée. L'EDTA affectera la liaison de l'annexe V et du PS.

4. Une fois que les cellules adhérentes sont stimulées par l'apoptose, si certaines des cellules flottent, il est nécessaire de recueillir le surnageant de la culture cellulaire et des cellules adhérentes et de les tacher en même temps, ce qui rendra les résultats plus précis.

5. L'annexe V-IF647 et PI sont sensibles à la lumière, veuillez éviter la lumière pendant le fonctionnement. Le test doit être effectué dès que possible après la réaction.

6. Veuillez porter des vêtements de laboratoire et des gants jetables lors de l'expérience pour éviter la contamination et assurer la sécurité.

Ce produit est à des fins de recherche scientifique uniquement, pas pour le diagnostic clinique!

G1514-50TB

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