TÉLÉPHONER

+86 (027) 5111 3188

catégorie de produit

Partager sur:

Annexe V-PE / 7-AAD Cell de détection de détection de l'apoptose cellulaire

Volume: 50t
  • G1512-50T
  • Servicebio
  • Servicebio

Description du produit

Information produit:

Nom du produit

Chat. Non.

Le volume

Annexe V-PE / 7-AAD Cell de détection de détection de l'apoptose cellulaire

G1512-50T

50t

G1512-100T

100t

Description du produit:

L'apoptose est un processus physiologique normal qui se produit dans le processus de développement embryonnaire et de maintenance des homéostases tissulaires. Il est accompagné de nombreux changements morphologiques. Parmi eux, la perte de la membrane cellulaire est l'une des premières caractéristiques de l'apoptose. Dans des cellules normales, la phosphotidylserine (PS) n'est distribuée que sur le côté intérieur de la bicouche phospholipide de la membrane cellulaire, mais au stade précoce de l'apoptose, PS se retournera du côté intérieur de la membrane lipide au côté extérieur, l'exposant à l'extérieur de la cellule. ANNEXIN V (ANNEXIN V) est une protéine de liaison à la phospholipide de CA2 + -Dépendante avec une affinité élevée pour PS et se lie spécifiquement aux cellules exposées à PS. Par conséquent, l'annexe V est utilisée comme l'un des indicateurs de détection de l'apoptose de la cellule précoce. 7-AAD est un colorant d'acide nucléique qui ne peut pénétrer que dans la membrane cellulaire des cellules apoptotiques et des cellules mortes tardives et tacher le noyau pour marquer des cellules apoptotiques et nécrotiques tardives.

Ce produit utilise le phycoérythrine (phycoérythrine, PE) pour étiqueter l'annexe V comme une sonde de détection pour détecter l'apoptose précoce des cellules. Dans le même temps, 7-AAD est utilisé pour distinguer les cellules de survie à partir de cellules nécrotiques et apoptotiques tardifs. Utilisation combinée d'annexine V-PE et 7-AAD, des cellules vivantes montrent des taches négatives (annexine V- / 7-AAD-), des cellules apoptotiques précoce montrent une seule fluorescence positive (annexine V + / 7-AAD-) et des cellules apoptotiques tardives et Les cellules nécrotiques ont montré une double fluorescence positive (annexe V + / 7-AAD +). Ce kit convient à la cytométrie de flux ou à la détection de microscope à fluorescence.

Stockage et transport

Transport dans la glace humide;

Conserver à 2-8 ° C dans le noir, valable 12 mois.

Composant:

Numéro de composant

Composant

G1512-50T

G1512-100T

G1512-1

Annexe V-PE

250 μL

2 × 250 μl

G1512-2

7-Aad

250 μL

2 × 250 μl

G1512-3

1 × tampon de liaison

25 ml

2 × 25 ml

Manuel de l'utilisateur du produit

1 pc

Étapes d'opération:

1. Cellules suspendues: Prenez la suspension cellulaire et ramassez les cellules par centrifugation à 500 g pendant 5 min à 4 ° C;

Cellules adhérentes: Collectez d'abord le surnageant de la culture cellulaire. Après la digestion avec la trypsine sans EDTA (G4002 recommandée), se combinent avec le surnageant de la culture cellulaire et collectez les cellules par centrifugation à 500 g pendant 5 min à 4 ° C. Le temps de digestion de la trypsine ne doit pas être trop long, afin d'éviter une digestion excessive et de causer de faux positifs.

2. Lavez les cellules deux fois avec du PBS pré-refroidi (G4202 recommandé) et collectez les cellules par centrifugation à 500 g à chaque fois pendant 5 min à 4 ° C;

3. remise en douceur des cellules dans le tampon de liaison pré-refroidi 1 × et ajuster la concentration de cellule à 1 ~ 5 × 106 / ml;

4. Prenez 100 μl de suspension cellulaire, ajoutez 5 μL annexine V-PE et 5 μL 7-AAD, mélangez doucement et protégez de la lumière à la température ambiante pendant 8 à 10 minutes;

5. Ajoutez 400 μl de tampon de liaison pré-fraisé 1 × partes, agitez doucement et effectuez la détection avec un cytomètre à flux ou un microscope à fluorescence dans un rayon de 1 h.

Analyse des résultats

1. Cytométrie de flux

une. Sélectionnez la tension appropriée et ajustez la compensation de la lumière pendant la détection et l'analyse de cytométrie de flux. Il est recommandé de définir une commande négative (sans marqueurs) pour régler la tension et la commande à une seule-étiquette (uniquement Annexine V-PE et uniquement Ajouter 7-AAD) pour le réglage et la compensation;

b. Exemples de référence de détection et d'analyse de cytométrie de flux:

Les cellules de lymphome T Jurkat ont été induites avec une camptothecine de 5 μm pendant 6 h. Reportez-vous à la procédure expérimentale ci-dessus et utilisez la cytométrie de flux pour détecter les résultats. Les résultats sont présentés dans la figure ci-dessous.

La longueur d'onde d'excitation maximale de PE est de 565 nm et la longueur d'onde d'émission maximale est de 578 nm; La longueur d'onde d'excitation maximale de 7-AAD est de 546 nm et la longueur d'onde d'émission maximale est de 647 nm. Le diagramme de points à deux dispersions a été tiré par le logiciel d'analyse pertinent du cytomètre de flux, avec PE sur l'Abscisse et 7-AAD sur l'ordonnée. Dans une expérience typique, les cellules vivantes n'ont pas de fluorescence et les points dispersés sont dans le premier quadrant de la gauche inférieure gauche. Les cellules apoptotiques au stade précoce ont une forte fluorescence rouge orange-rouge, et les points dispersés sont situés dans le deuxième quadrant de la droite inférieure. Les cellules apoptotiques tardifs et les cellules nécrotiques présentent une double fluorescence rouge orange et rose, et les points diffusés sont situés dans le troisième quadrant du haut droit.

2. Inspection du microscope de fluorescence

Ajoutez 5-10 μl de suspension cellulaire à double teintée avec l'annexe V-PE et 7-AAD sur la glissière en verre, recouvrez-le avec un verre de couvercle et observent sous un microscope à fluorescence avec un filtre à deux couleurs. L'annexe V-PE est un signal fluorescent orange rouge, 7-AAD est un signal fluorescent rose.

Remarques:

1. Pendant toute l'expérience, l'opération devrait être aussi douce que possible pour éviter la casse des cellules et affecter les résultats expérimentaux.

2. Le lavage des cellules avec PBS ne peut pas être omis, et en même temps, retirez le PBS résiduel autant que possible.

3. Lorsque vous utilisez la trypsine pour digérer les cellules, vous devez veiller à éviter les dommages artificiels des cellules et à contrôler le temps de digestion. Si le temps de digestion est trop court, les cellules doivent être soufflées pour tomber, ce qui est susceptible de causer des dommages mécaniques à la membrane cellulaire; Si le temps de digestion est trop long, la membrane cellulaire est également vulnérable aux dommages. Affecter les résultats du test. De plus, la pancréatine contenant EDTA ne peut pas être utilisée. L'EDTA affectera la liaison de l'annexe V et du PS.

4. Une fois que les cellules adhérentes sont stimulées par l'apoptose, si certaines des cellules flottent, il est nécessaire de recueillir le surnageant de la culture cellulaire et des cellules adhérentes et de les tacher en même temps, ce qui rendra les résultats plus précis.

5. L'annexe V-PE et 7-AAD sont sensibles à la lumière, veuillez éviter la lumière pendant le fonctionnement. Le test doit être effectué dès que possible après la réaction.

6. Veuillez porter des vêtements de laboratoire et des gants jetables lors de l'expérience pour éviter la contamination et assurer la sécurité.

Ce produit est à des fins de recherche scientifique uniquement, pas pour le diagnostic clinique!

1Réactif -1 (1)téléchargerSlice 13Slice 12Slice 10Slice 14

Contact us

Liens rapides

catégorie de produit

Entrer en contact

 5ème étage, 22 bâtiment, Biopark, Gaoxin 2e route n ° 388, zone de développement de haute technologie de l'Est, Wuhan, Hubei, Chine 430079
 +86 (027) 5111 3188
Copyright © 2021 Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.