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FITC-TYRAMIDE POUR AMPLIFICATION DE SIGNAL TYRAMIDE RÉACTE D'IMMUNOFLUORESSENT

Volume: 50UL
  • G1222-50UL
  • Servicebio

Description du produit

Fitc-tyramide

CAT N ° G1222-50UL

Présentation du produit:

Ce produit FITC-TYRAMIDE, Tyramide marqué FITC, est utilisé pour la technologie d'amplification de signal Tyramide (TSA, l'amplification du signal Tyramide), ci-après dénommée la technologie TSA. Le principe principal de la technologie TSA consiste à utiliser la réaction de la peroxydase du tyramide (c'est-à-dire que le sel de tyramide étiqueté fluorescente constitue un site de liaison de liaison covalent sous Catalysé par HRP catalysé par H2O2) pour produire un grand nombre de réactions enzymatiques. Ce produit peut interagir avec les résidus de protéines environnants (y compris les résidus de tryptophane, d'histidine et de tyrosine) se combiner pour former une grande quantité de dépôt de fluorescéine au site de liaison antigène-anticorps pour obtenir une amplification du signal. Vous pouvez également utiliser différents tyramines fluorescentes pour atteindre de multiples taches fluorescentes en répétant plusieurs fois d'immunolabeling.

Les données de spectre de fluorescence des produits de la série sont les suivantes:

Numéro d'article

Nom du produit

spécification

Ex / em

G1222-50μL

Fitc-tyramide

50 μl

492/518

G1223-50μL

Cy3-Tyramide

50 μl

555/569

G1231-50μL

if488-tyamide

50 μl

491/516

G1233-50μL

Si555-Tyramide

50 μl

557/570

G1232-50μL

IF647-Tyramide

50 μl

656/670

Contenu du colis:

Numéro d'article du produit

Nom du produit

spécification

Fitc-tyramide

G1222-50μL

50 μl

Conditions de stockage:

Les packs de glace transport, le magasin à -20 ° C, la période valide est de 6 mois.

Instructions

Prendre des tranches de tissu à titre d'exemple, l'eau dans les étapes expérimentales suivantes est de l'eau pure et les réactifs impliqués se réfèrent aux produits liés à ServiceBio:

1. déparaffiniser des sections de tissu à l'eau;

2. Récupération de l'antigène: Selon l'anticorps principal utilisé et le type d'échantillon, utilisez une méthode appropriée pour effectuer une récupération de l'antigène sur la section tissulaire. 1 × PBS (G4202 ou G0002 est recommandé) Laver 3 fois, 5 min à chaque fois;

3. Utilisez un stylo papeux pour encercler et marquer le tissu;

4. (Facultatif) Ajoutez un éruption automatique de l'autofluorescence de tissu (solution G1221A recommandée) au tissu, incubez à la température ambiante pendant 30 min, puis lavez-vous pendant 5 min;

5. Inactivez la peroxydase endogène: ajoutez 3% H2O2 à la section pour couvrir le tissu et incuber dans l'obscurité à la température ambiante pendant 25 minutes, pour bloquer la peroxydase endogène pour réduire la coloration des arrière-plan non spécifique. Laver 3 fois avec 1 × PBS, 5 min à chaque fois;

6. Bloc: Une fois les diapositives légèrement séchées, 3% BSA ou sérum sont ajoutés goutte à goutte pour sceller pendant 30 minutes. Si l'anticorps principal est d'origine de la chèvre, bloquez avec 10% de sérum d'âne et bloquez 3% de BSA pour d'autres sources;

7. Incuber l'anticorps principal: diluer l'anticorps principal à une concentration appropriée avec une solution de PBS ou une solution de blocage 1 × (G2010 est recommandée). Sacez doucement la solution de blocage sur la section, ajoutez l'anticorps primaire dilué goutte à goutte pour recouvrir le tissu et placez la section à plat dans une boîte de chambre humide avec de l'eau et incubez toute la nuit à 4 ° C. Laver 3 fois avec 1 × PBS, 5 min à chaque fois;

8. Incuber l'anticorps secondaire marqué par HRP: Diluer l'anticorps secondaire à une concentration appropriée avec une solution de PBS ou une solution de blocage 1 × (G2010 est recommandée), ajoutez l'anticorps secondaire goutte à goutte au tissu et incubez à la température ambiante pendant 50 min. Laver 3 fois avec 1 × PBS, 5 min à chaque fois;

9. Diluer FITC-TYRAMIDE 1: 500 avec TBST (ajoutez H2O2 à la concentration finale de 0,03 ‰, W / V avant utilisation) pour préparer une solution de travail de coloration TSA. Ajoutez 100 μL de solution de travail de coloration à chaque échantillon et incubez pendant 10 min à température ambiante dans le noir. Laver avec 1 × PBS 3 fois, 5 min à chaque fois; (Remarque: une solution de travail de coloration TSA est recommandée pour être préparée pour une utilisation actuelle et doit être stockée à 4 ° C et protégée de la lumière. Il est efficace dans les 24h)

10. Traitement à micro-ondes: la section de tissu est placée dans une boîte de réparation remplie de solution de récupération d'antigène (choisissez la solution de récupération d'antigène appropriée en fonction du type de tissu et de l'anticorps) pour un traitement de chauffage à micro-ondes pour éliminer les anticorps primaires et secondaires liés. Dans cette étape, il est nécessaire d'empêcher des flocons secs causés par une évaporation liquide excessive.

(Remarque: Si vous devez effectuer une double coloration fluorescente double ou plusieurs, procédez selon cette étape. Si vous n'avez pas besoin d'effectuer une double tache fluorescente double ou plusieurs, ignorez cette étape et passez à l'étape 12)

11. Répétez les étapes 7-10, incuber le deuxième anticorps principal, l'anticorps secondaire et l'étiquette TSA, ainsi que le traitement par micro-ondes pour éliminer l'anticorps principal et l'anticorps secondaire.

12. NUCLEUS CONTAGNANT AVEC DAPI: Une fois les sections séchées légèrement, ajoutez une solution de coloration DAPI (G1012 recommandée) au tissu et incubez pendant 10 minutes à température ambiante dans le noir. Laver 3 fois avec 1 × PBS, 5min à chaque fois.

13. (Facultatif) Tissu Autofluorescence Domking: Ajoutez la désordre Autofluorescence (solution G1221B recommandée) goutte à goutte au tissu, incuber à la température ambiante pendant 5 minutes et rincer à l'eau courante pendant 3 minutes.

14. Examen de montage et microscopique: Une fois les sections séchées légèrement, ajoutez des comprimés de montage de trempe anti-fluorescence (G1401 est recommandé). Sélectionnez le canal de fluorescence approprié pour observer et collecter des images. Les tranches peuvent être stockées pendant 15 jours à 4 ° C dans une boîte à glissière anti-lumière.

Précautions

1. Une fois le produit fondu à la température ambiante, utilisez une centrifugeuse pour une centrifugation courte et utilisez une pointe d'aspiration propre après avoir soufflé et mélanger.

2. Comparé à l'anticorps secondaire fluorescent, le kit TSA a une sensibilité plus élevée et un signal plus fort. Par conséquent, la concentration de l'anticorps principal doit être réduite, généralement de 5 à 10 fois sur la base du rapport de dilution recommandé dans le manuel d'anticorps, afin de réduire la fluorescence de fond causée par une liaison non spécifique. Il est recommandé de définir la concentration de gradient de l'anticorps primaire pour obtenir le meilleur effet.

3. Si la fluorescence de fond est forte, il est recommandé d'ajouter une étape de trempe d'autofluorescence de tissu.

4. Le rapport de dilution recommandé du tyramide fluorescent est de 1: 500 et le rapport de dilution peut être ajusté en fonction des résultats expérimentaux (la plage de ratio de dilution recommandée est de 1: 200-1: 1000).

5. Pour un étiquetage fluorescent multiple, il est recommandé d'incuber l'anticorps polyclonal en premier, puis incubez l'anticorps monoclonal; Incuber l'anticorps correspondant à la protéine cible à faible abondance, puis à incuber l'anticorps correspondant à la protéine cible à grande abondance.

6. Veuillez porter un manteau de laboratoire et des gants jetables pendant le fonctionnement.

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