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G3409-5000U recombinant TeV protéase de son étiquette

Spécification:5000l
Usage:Enlevez le MBP, la TPS, ses protéines marquées ou d'autres protéines de fusion.
Stockage et transport:Transport avec glace humide; Conserver à -20, valable 12 mois.
u:
  • G3409-5000U
  • Servicebio

Description du produit

Aperçu

La protéase de TeV recombinante est une protéine exprimant la protéase de cystéine du virus de tabac de tabac (Tev) avec son étiquette à Escherichia coli. La protéase TEV est une protéase de cystéine couramment utilisée, qui peut reconnaître spécifiquement la séquence d'heptopeptide Glu-ASN-Leu-Tyr-Phe-Gln-Leu-Tyr-Phe-Gln-Gly / Ser (ENLYFQG / S) et effectuer une digestion enzymatique entre GLN (Q) et GLY / SER. (G / s) résidus d'acides aminés. La température optimale de la digestion de la protéase TEV recombinante est de 30 et l'activité enzymatique de la protéase recombinante TEV est élevée dans la plage de 29-34. Cependant, lorsque la température atteint ou dépasse 37, l'activité enzymatique de la protéase de TeV recombinante diminue fortement. Dans l'opération réelle, afin de préserver la structure et de l'activité biologique de la protéine cible autant que possible, il est recommandé d'utiliser la digestion de l'enzyme de protéase TEV pendant une nuit à 4. La protéase de TeV recombinante est active dans la plage de pH de 6,0 à 9,0, mais perd son activité enzymatique lorsque le pH est inférieur ou égal à 5.tev protéase a toujours une activité élevée dans un imidazole de 400 mm. Par conséquent, pour la purification de la protéine cible contenant son étiquette par colonne de nickel, la protéase TEV peut être directement ajoutée à la solution de protéine cible purifiée contenant une concentration élevée d'imidazole. À 4, l'imidazole est éliminé par dialyse et la digestion enzymatique est effectuée en même temps. Il est également possible de retirer son étiquette par digestion enzymatique avec la protéase TEV après la dialyse. La protéase TEV avec sa balise dans la solution de protéine cible après la digestion enzymatique et l'excision sa balise peut être éliminée par reliure avec la colonne de nickel.

Application:Il est souvent utilisé pour éliminer le MBP, la TPS, ses protéines marquées ou d'autres protéines de fusion. La protéase TEV a sa propre étiquette et peut se lier à la colonne de nickel.

La source:Virus de tabac Virus (Tev) protéase de cystéine, expression recombinante d'Escherichia coli, contenant son étiquette.

Enzyme Activité Définition:À 30 ° C, pH8.0, 3μg de substrat (contenant le site de clivage de protéase recombinant de TeV) peut être clivé à moins de 85% de l'unité d'activité d'enzyme requise.

Inactivation ou inhibition:Les inhibiteurs communs de la protéase de sérine, tels que PMSF, Aebsf, Bestatin, Peptstatin et EDTA, n'hiber pas l'activité de protéase TEV. Les inhibiteurs de la protéase ciblant les résidus de cystéine, tels que NEM ou IAA, peuvent inhiber de manière significative l'activité de la protéase TEV. La protéase TEV maintient toujours une activité d'enzyme supérieure à une concentration plus élevée d'imidazole.

Pureté et concentration:SDS-PAGE Pureté de test ≥ 95%, 10 U / μL.

Solution de stockage de protéase TEV recombinante:50 mm Tris-HCl, NaCl de 250 mm, 1 mm EDTA, 5 mm DTT, 50% (v / v) glycérol, pH 8,0.

10 × tampon Tev:500 mm Tris-HCl, NaCl de 500 mm, 5 mm EDTA, 10 mm DTT, pH 8,0.


Numéro de composant

Composant

G3409-5000U

G3409-1

Protéase de TeV recombinante (sa balise) (10 u / μl)

500 μL

G3409-2

10 × tampon Tev

3 × 1 ml

G3409-3

Protéine de contrôle

100 μL

Utilisation du produit


1. Recommandation du système de digestion 1.Portenase

Composant

Le volume

10 × tampon Tev

5 μL

Protéines d'intérêt

30 μg

Protéase de TeV recombinante (sa balise) (10 u / μl)

1 μL

ddh2O

À 50 μL

2. Le système de réaction a été placé à 30 ℃ pendant 1 à 4h. Si la protéine cible n'est pas stable à 30 ° C, le système de réaction peut être placé à 4 nuit pour la digestion enzymatique (environ 16h).

3. Le dosage de la page SDS a été effectué sur un échantillon de 10 μL de produit de digestion pour évaluer la dose de digestion et les conditions de réaction


Remarques


1. Les produits enzymatiques doivent être placés dans une boîte de glace ou un bain de glace et stockés à -20 immédiatement après utilisation. Un stockage séparé est recommandé.

2. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter un manteau de laboratoire et vos gants jetables pour fonctionner.


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