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Kit SweScript RT I First Strand Strand Synthesis Synthesis

  • G3330-50

Description du produit

Présentation du produit:

Ce produit utilise la transcriptase inverse mutante modifiée pour synthétiser le premier brin d'ADNc avec l'ARN total ou l'ARNm comme modèle pour une transcription inverse efficace. Le kit contient tous les réactifs nécessaires pour synthétiser le premier brin d'ADNc de haute qualité et fournit deux types d'amorces de synthèse d'ADNc à choisir: l'apprêt hexamère aléatoire et l'apprêt oligo (DT) 18 amorce synthétisée des produits d'ADNc à échelle pouvant être directement. utilisé pour les réactions PCR ou QPCR suivantes. SweScript RT I (La transcriptase inverse) est une transcriptase inverse mutante basée sur la transcriptase inverse M-MLV et obtenue par un criblage évolutif in vitro. Swescript RT I n'a pas d'activité de RNase H. La dégradation de l'ARN dans le gabarit de l'hybridation ADN / ARN lors de la première réaction de synthèse de l'ADNc de brin a été évitée, de manière à assurer la quantité et la longueur de la première synthèse de l'ADNc de brin. Comparé à l'enzyme de type sauvage, la stabilité thermique et l'efficacité de la synthèse de SweScript RT I sont considérablement améliorées et l'ADNc peut être synthétisé efficacement dans la gamme 42-55 ℃, ainsi que l'ADNc tant que 10kb.

Contenu du colis:

Chat. Non.

Description du produit

Le volume

G3330

Kit SweScript RT I First Strand Strand Synthesis Synthesis

50RXNS / 100RXNS

Composants:

Numéro de composant

Composant

G3330-50

G3330-100

G3330-1

Sweescript RT i Enzyme Mixa

50ul

100UL

G3330-2

5 × tampon de réactionb

Fusionné

400L

G3330-3

Oligo (dt) 18 amorce (100um)

50ul

100UL

G3330-4

Primer Hexamer aléatoire (100um)

50ul

100UL

G3330-5

Eau sans nucléase

1ml

1ml

Manuel

1 pc

1 pc

a: Avec inhibiteur de la RNase

b: Avec mélange DNTP & mg² +

Condition de stockage:

Transport de sac de glace humide; Stocké à -20 température, valable 12 mois.

Usage:

La première étape pour la synthèse de l'ADNc

1. Préparation du système de réaction de transcription inverse (système de réaction 20UL recommandé)

Composant

Le volume

5 × tampon de réaction

4ul

Oligo (dt) 18 amorce (100um)

1l

ou primaire hexamère aléatoire (100um)

ou 1UL

ou apprêt spécifique au gène (2UM)

ou 1UL

Sweescript RT i Enzyme Mix

1l

ARN total / ARNm *

0,1 ng-5ug / 10 pg-0.5ug

Eau sans nucléase

Ajouter à 20ul

Remarque: Pour les modèles de GC élevés ou complexes, la gabarate d'ARN, les amorces de transcription inverse et l'eau sans nucrenase peuvent être mélangées à l'avance, puis refroidies sur glace rapidement après avoir été maintenue à 65 ° C pendant 5 min. Et puis vous ajoutez les autres composants réactionnels.

2. mélanger et centrifuger doucement;

3. Réglage du programme de transcription inverse:

Température

Time

25a

5 min

50b

15-30 min

85

5 s

A: Par exemple, l'apprêt hexamer aléatoire est sélectionné et incubé à 25 pendant 5 min, puis la réaction ultérieure est effectuée. Si vous choisissez d'utiliser l'amorce OLIGO (DT) 18 ou une amorce spécifique au gène, vous pouvez effectuer directement une réaction à 50;

B: Pour les modèles de GC élevés ou complexes, la température de la transcription inverse peut être élevée à 55 ° C.

Remarques:

1. Veuillez porter des gants jetables pendant le fonctionnement pour éviter la contamination de la RNase.

2. Les produits de transcription inverse peuvent être stockés à -20 pendant une courte période. Si le stockage à long terme est nécessaire, il est recommandé de les stocker à -80 après l'emballage pour éviter les cycles répétés de gel.

3. Si le modèle est d'origine eucaryote, il est recommandé de sélectionner une amorce d'oligo (dt) 18 et de la pair avec la queue de 3 'poly une ARNm eucaryote pour obtenir le rendement le plus élevé d'ADNc de longueur maximale.

4. Pour la transcription inverse de l'ARN procaryote, l'apprêt hexamer aléatoire ou l'apprêt spécifique au gène doit être utilisé.

5. L'apprêt hexamère aléatoire a une applicabilité large et convient à l'ARNm, à l'ARNr, à l'ARNT, aux petits modèles d'ARN et de LNCRNA.

6. Si la transcription inverse est suivie par le test QPCR, l'apprêt à oligo (DT) 18 et l'apprêt d'hexamer aléatoire peut être mélangé pour rendre l'efficacité de la synthèse de l'ADNc dans toutes les régions d'ARNm, ce qui contribue à améliorer l'authenticité et la répétabilité des résultats quantitatifs.

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