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Kit d'immunohistochimie Kit anti-souris d'anticorps secondaire en deux étapes Kit d'immunohistochimie en deux étapes

  • G1216-200T
  • Servicebio

Description du produit

Présentation du produit


Ce kit est un kit d'immunohistochimie à deux étapes à haute sensibilité, adapté au développement des couleurs ultérieures d'anticorps dont les anticorps primaires sont dérivés de souris. Le kit contient des IgG anti-souris conjugués par la peroxydase de raquillée de la peroxydase HRP. Ce produit convient aux anticorps primaires dérivés de la souris. Dans les expériences IHC et Western Blot, les anticorps secondaires de la souris anti-souris de chèvre de HRP sont combinés à l'anticorps primaire dérivé de la souris (réagit avec l'antigène d'abord) est combiné puis réagit avec DAB. DAB est un substrat de la peroxydase de raifort (HRP). Sous la catalyse du HRP, DAB produit des précipités bruns pour atteindre l'amplification du signal et le développement des couleurs.


Stockage et transport


Transport dans la glace humide; Stockez l'anticorps secondaire à -20 ° C et stockez la dilution DAB et 50 × Solution de stock de DAB à 4 ° C; La période de validité est de 12 mois.


Prêt à travailler


1. Apportez votre propre PBS (recommandé G4202, G0002), réactifs de contre-systèmes nucléaires (solution de coloration de l'hématoxyline recommandée G1004, solution de différenciation de l'hématoxyline G1039, Solution bleue de l'hématoxyline G1040), alcool dégradé, xylène, comprimés de montage, etc.


2. Préparez la solution de travail de l'anticorps secondaire: diluer l'anticorps secondaire anti-souris anti-souris marqué HRP avec PBST (pH 7,2-7.4) sur un rapport de 1: 200 pour obtenir la solution de travail de l'anticorps secondaire. Préparé pour une utilisation immédiate, utilisez dans les 48 heures.


3. Préparer la solution de travail de la couleur DAB: ajoutez 20 μl de 50 μl de solution mère DAB à chaque 1 ml de diluant DAB, mélangez bien pour une utilisation ultérieure. Préparé à la demande, prêt à être utilisé maintenant.




Pas


1. Selon les procédures immunochisochimiques de routine, les sections de tissu sont pré-déparaffinisées, récupération de l'antigène, bloquées et incubées avec l'anticorps primaire, puis lavées trois fois avec du PBS pendant 5 minutes chacune.


2. Incubation d'anticorps secondaire: Ajoutez 50-100 μL de la solution de travail d'anticorps secondaire à chaque tranche pour couvrir complètement le tissu et incuber à la température ambiante pendant 30 à 60 min. Lavez trois fois avec du PBS pendant 5 minutes à chaque fois.


3. DAB Développement des couleurs: Ajoutez une solution de travail DAB de 50 à 100 μl à goutte à goutte à chaque tranche, incubez pendant plusieurs minutes à la température ambiante, observe sous un microscope pour contrôler le développement des couleurs à l'effet attendu, puis laver immédiatement avec de l'eau pour arrêter la Développement des couleurs.


4. (Facultatif) Retrait des noyaux cellulaires: Les sections sont colorées avec une solution de coloration de l'hématoxyline pendant 3 à 5 minutes, puis lavées à l'eau du robinet; Après différenciation rapide avec la solution de différenciation de l'hématoxyline pendant 3-5 s, puis lavés avec de l'eau du robinet; lavé avec de l'eau du robinet ou retourné en bleu avec une solution d'hématoxyline 3-5 s.


5. Montage: Les tranches sont déshydratées à l'alcool dégradé selon les marches habituelles, le xylène est transparent et les diapositives sont montées avec une gomme neutre.




Précautions


1. Si l'arrière-plan est trop sombre lors du développement des couleurs immunohistochimiques, envisagez d'étendre le temps de lavage, d'utiliser une solution de blocage appropriée pour le blocage, inactivez la catalase endogène, raccourcissez le temps de développement des couleurs et réduisez la concentration de l'anticorps secondaire. S'il n'y a pas de développement de couleur ou que le développement des couleurs est trop léger, vous pouvez augmenter de manière appropriée la concentration de l'anticorps principal et l'anticorps secondaire pour étendre le temps de développement des couleurs, puis vérifier si l'anticorps secondaire est normalement développé.


2. DAB est nocif pour le corps humain, soyez prudent lorsque vous manipulez et veillez à éviter tout contact direct avec le corps humain ou l'inhalation du corps.

G1216-200T

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