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Kit de coloration β-galactosidase de la cellule de vieillissement G1073-100T

Spécification:100 t
Utilisation du produit:Coloration de tissus sénescents ou de cellules sencescentes.
Stockage et transport:

La poudre X-GAL a été dissoute avec 5 ml DMF dans le kit, divisé en 1 ml / tube et stocké à -20de manière sombre pour éviter la décongélation répétée. Une fois la solution préparée, la durée de conservation de X-Gal était de 3 mois. Si elle continue d'être utilisée au-delà de la date d'expiration, elle peut affecter les résultats expérimentaux.

Le kit est valable un an.

T:
  • G1073-100T
  • Servicebio

Description du produit


Description du produit

La plupart des cellules normales ont une capacité limitée de diviser et, lorsqu'elles ne peuvent pas se diviser, elles deviennent des cellules Senescent.Senescentes sont généralement plus grandes et ont une expression de la β-galactosidase élevée et une activité de β-galactosidase plus élevée peut être détectée à pH6.0.Le kit est Sur la base de ce principe, visant au vieillissement de la régulation de niveau de l'activité de la β-galactoïde de β-galactoïdase de vieillissement et de la coloration des tissus ou de la coloration cellulaire a été utilisé comme substrat pour produire des produits bleus catalysés par une β-galactosidase de sénescente spécifique à la cellule et observée sous la lumière microscope.

Utilisation du produit
Nom du produit

Code

Spécificité

Solution de fixation de coloration β-galactosidase

G1073-1

100 ml

Solution de coloration β-galactosidase a

G1073-2

100 ml

β-galactosidase tache b

G1073-3

1,25 ml

Dmf

G1073-4

5 ml

X-gal

G1073-5

100 mg, poudre, 1 tube


Usage:


1. Préparation de ReaGen

(1) Préparation de votre propre solution de tampon PBS.

(2) La poudre X-Gal 100 mg a été complètement dissoute et mélangée à 5 ml de DMF pour obtenir une solution X-GAL, qui a ensuite été divisée en tubes à centrifuger de 1,5 ml avec 1 ml pour chaque tube et stocké à -20 à l'écart de la lumière.

(3) La solution de teinture a été préparée dans les proportions présentées dans le tableau ci-dessous:


Solution de coloration β-galactosidase a

940 μL

β-galactosidase tache b

10 μL

X - solution gal

50 μL


2. Étape de coloration

(1) pour cellule adhérente

a) Les cellules cultivées dans des plaques à 6 puits (ou des glissières cellulaires) ont été aspirées du milieu de culture cellulaire, lavées deux fois avec du PBS, puis une solution de fixation de la coloration de la β-galactosidase de 1 ml a été ajoutée et fixée à la température ambiante pendant 15 minutes.

b) la solution fixe a été jetée et les cellules ont été lavées avec du PBS pendant 3 fois, 2 min

c) Le PBS a été aspiré autant que possible, 1 ml de solution de coloration a été ajouté à chaque puits et incubé à 37 pour 2h jusqu'à la nuit. Note: NE PAS incuber en 37 incubateur de dioxyde de carbone.Durant la coloration, le développement des couleurs devrait être observé à temps. Si l'expression de la β-galactosidase dans l'échantillon est élevée, la coloration peut être complétée dans quelques heures.Si l'expression de l'enzyme de β-galactoside est faible, le temps d'incubation doit être prolongé de manière appropriée, au cours de laquelle la plaque à 6 puits devrait être scellé avec une pellicule de plastique ou un parafilm pour empêcher l'évaporation du liquide.

d) Observation dans le microscope lumineux ordinaire.Si il n'est pas possible d'observer et de compter dans le temps, le fluide de travail de la coloration peut être éliminé, les cellules peuvent être lavées avec du PBS, puis 2 ml de PBS peuvent être ajoutés et stockés pendant 1 semaine à 4 heures. ℃ .or, après avoir retiré le fluide de coloration, ajoutez 70% de glycérine pour couvrir les cellules et les cellules peuvent être stockées pendant une longue période à 4 ° C.Si il s'agit d'une diapositive cellulaire, elle peut être déshydratée par de l'éthanol à gradient, puis d'égoutter comprimé scellé transformé en tranche permanente pour la préservation.

(2) pour la section gelée

a) Les sections congelées ont été équilibrées à la température ambiante pendant 10min.circle le tissu avec une course de composition.

b) Une quantité appropriée de solution de fixation de la coloration β-galactosidase a été ajoutée au tissu pour recouvrir complètement le tissu et fixé à la température ambiante pendant 20 minutes.

c) Les sections de tissu ont été trempées et lavées par PBS pendant 3 fois, 5min chacune.

d) la section est placée dans une boîte humide anti-lumière et une quantité appropriée de solution de coloration est ajoutée au tissu pour couvrir complètement le tissu. La boîte humide a été incubée à 37 ° C et le rendu des couleurs a été observé sous le microscope chaque 2h. Si aucun rendu de couleur n'a été observé, l'incubation a été poursuivie jusqu'à ce que les cellules séniables montraient une couleur sur le tissu.Si l'échantillon doit être incubé pendant une nuit, une quantité suffisante de la solution de teinture doit être ajoutée pour empêcher le liquide d'évaporer.

e) Une fois la couleur tissulaire développée, la solution de coloration a été éliminée et les sections étaient trempées dans du PBS pendant deux fois et trempées dans de l'eau pure pendant deux fois.

f) Des gouttes de colorant rouge solide nucléaire ont été ajoutées pendant 3 minutes et lavées pendant 3 fois. Cette étape n'est pas requise. Si le noyau doit être coloré, nous pouvons utiliser notre colorant rouge de fixation nucléaire (G1035).

g) déshydrate avec éthanol anhydre pendant 2 fois, 5min chacun, xylène transparent pendant 5min, puis laisser tomber la gomme neutre pour sceller la pièce.



Résultat de la coloration:

Les cellules sénescentes sont bleues.


Légende:

1

Fig.1 Les cellules WI-38 ont été teintées par kit de β-galactoside. La figure à gauche montre les cellules Senescent Wi-38 sans capacité de division et de prolifération mais toujours en vie. Les cellules de coloration positives après la coloration sont supérieures à 95%. L'image sur la droite montre des cellules WI-38 récemment ressuscitées avec moins de 3 passages (passage précoce) et aucune cellule significativement positive après la coloration.



Remarques

1. La solution de fixation de la coloration β-galactosidase est toxique et corrosive, alors faites attention à la protection pendant le fonctionnement.

2. La solution X-GAL doit être complètement dégivrante à la température ambiante et mélangée avant l'utilisation.β-galactosidase Solution de coloration A et B doit être restaurée à la température ambiante avant utilisation. La solution de travail de teinture préparée doit être entièrement mélangée sans précipitation avant utilisation avant utilisation.

3. La réaction de coloration de la β-galactosidase de cellules sénescentes dépend de conditions de pH spécifiques et ne peut pas être effectuée dans un incubateur de CO2.

La réaction de coloration de la β-galactosidase de cellules de sénescents dépend des conditions de pH spécifiques et ne peut pas être effectuée dans un incubateur de CO2 incubé pour développer la couleur, sinon elle affectera le pH du fluide de travail de teinture, ce qui entraînera une défaillance de la teinture.

4. Choisissez des consommables de polypropylène ou de verre lors de la préparation de la solution de teinture

5. Heure de développement des couleurs 2H- Nuit, au cours de laquelle le développement des couleurs doit être observé plusieurs fois plusieurs fois, il peut entraîner des résultats négatifs; trop longtemps peut conduire à de faux positifs. Le temps de développement de la couleur est étroitement lié à la quantité de β- Galactosidase contenue dans l'échantillon lui-même.

6. La coloration β-galactosidase des sections de tissu nécessite une préparation plus élevée des échantillons. Les échantillons doivent être stockés à -80 ℃ et l'expérience doit être complétée dans une courte période dès que possible.Le β-galactosidase est très facile à inactiver, de stockage inapproprié de l'échantillon ou trop longtemps peut entraîner une inactivation de l'enzyme , la coloration n'est pas positive.

7. Avant de préparer la solution de teinture, la valeur du pH de la solution de teinture doit être vérifiée. S'il ne s'agit pas de 6.0 (le pH peut changer en raison des conditions de conservation), HCl ou NaOH doit être utilisé pour ajuster le pH à 6,0 avant utilisation.


Emballage et expédition

Tous nos produits seront emballés dans un carton standard.

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