TÉLÉPHONER

+86 (027) 5111 3188

catégorie de produit

Partager sur:

Kit de détection de cycle cellulaire et de l'apoptose

Volume: 50t

  • G1700-50T
  • Servicebio

Description du produit

Information produit

Nom du produit

Chat. Non.

spécification

Kit de détection de cycle cellulaire et de l'apoptose

G1700-50T

50t

Présentation du produit:

Le cycle cellulaire fait référence à l'ensemble du processus qu'une cellule passe de l'achèvement d'une division à la fin de la prochaine division. Il est principalement divisé en deux phases: l'interphase et la mitose (phase m); La phase intercellulaire est principalement composée de la prohase de la synthèse de l'ADN (phase G1). ), Phase de synthèse de l'ADN) et synthèse tardive de l'ADN (phase G2). La séquence des modifications de l'ensemble du cycle de cellule peut être représentée par G1 → S → G2 → m. Premièrement, la période G1: la cellule synthétise principalement l'ARN et la protéine et d'autres substances pour préparer la cellule pour le matériau et l'énergie pour entrer la phase S; Ensuite, pénètre dans la phase S: ​​la cellule commence à synthétiser de l'ADN et à certains histones, et la teneur en ADN de la cellule commence à augmenter; Enfin jusqu'au stade G2: À ce stade, la teneur en ADN de la cellule est devenue deux fois celle de la période G1 et la réplication de l'ADN s'est arrêtée et une grande quantité de protéines et d'autres substances sont synthétisées pour entrer dans la période de mitose; Si G0 (cellules cessent temporairement la période de division et de différenciation), la phase de la phase de repos / g1, la teneur en ADN dans la cellule est de 1n; Ensuite, la teneur en ADN dans la cellule de la phase G2 est de 2n; et la cellule de phase S S dans la phase G1 et G2, la teneur en ADN est comprise entre 1N et 2N; et dans les cellules apoptotiques, le noyau subira de la condensation et de la fragmentation de l'ADN, entraînant la perte de certains fragments d'ADN génomique, de sorte que sa teneur en ADN est inférieure à 1n. Le prétendu pic sous-G1 apparaît sur l'image de fluorescence de la cytométrie de flux, c'est-à-dire des cellules apoptotiques. Pic. Par conséquent, le cycle et l'état de la cellule peuvent être jugés en fonction du contenu de l'ADN cellulaire.

L'apoptose peut également être détectée en observant les modifications de la diffusion de la lumière de cellules avec un cytomètre à flux. Lorsqu'une cellule subit une apoptose, des corps apoptotiques sont produits en raison de la condensation de cytoplasme et de chromatine et de fragmentation nucléaire, ce qui modifie les propriétés de diffusion de la lumière de la cellule. Au stade précoce de l'apoptose, la chromatine se rétrécit, la densité cellulaire augmente et la couleur de diffusion de la lumière à angle avant est considérablement réduite; À l'étape tardif de l'apoptose, les cellules produisent des corps apoptotiques et la diffusion de la lumière à angle avancée et la diffusion de la lumière angle latérale sont considérablement réduites.

Le kit d'analyse du cycle cellulaire et de l'apoptose utilise la méthode de coloration classique de propidium pour détecter et analyser le cycle cellulaire et l'apoptose. L'utilisation de l'iodure de propidium peut être intégrée à un ADN à double brin et le rendre fluorescent, et l'intensité de la fluorescence est proportionnelle à la teneur en ADN à double échouement; Combiné avec les changements réguliers de la teneur en ADN dans différents cycles de cellules, il peut distinguer le cycle de la cellule et le statut. Ce kit peut être utilisé pour la détection du cycle cellulaire et de l'apoptose des cellules de tissus, des cellules adhérentes ou suspendues (si elle est utilisée pour la détection de cycle de la cellule tissulaire et de la détection de l'apoptose, le tissu doit être digéré dans un seul état cellulaire avant que la détection puisse être effectuée).

Stockage et transport

Transport dans la glace humide; stocker dans l'obscurité à -20 ° C et stocker dans une tampon de coloration à 4 ° C; Valable pendant 12 mois.

Composant

Numéro de composant

Composant

G1700-50T

G1700-1

Solution de coloration Pi (50 ×)

500 μL

G1700-2

RNase un réactif (50 ×)

500 μL

G1700-3

Tampon

25 ml

Manuel de l'utilisateur du produit

1 pc

Préparation expérimentale

1. Moyen de culture cellulaire contenant du sérum;

2. solution de digestion de trypsine (G4001 est recommandée);

3. Tampon PBS (G4202 recommandé);

4. 75% d'éthanol.

Étapes d'opération:

1. Préparation des échantillons de cellule (le nombre de cellules est contrôlé à 1 × 105 ~ 1 × 106)

1.1. Pour les cellules adhérentes: Retirez le milieu de culture, ajoutez la solution de digestion de la trypsine pour digérer les cellules, observer les cellules à devenir rondes et lâches sous le microscope, ajoutez une quantité appropriée de milieu de culture cellulaire contenant du sérum pour arrêter la digestion, éloignez-les doucement les cellules. faire la suspension des cellules; Transférez la suspension dans un tube de centrifugeuse, centrifuge à 1000 g pendant 3 à 5 minutes, jetez le surnageant et conservez la culotte de cellule; Ensuite, rincez la granule de cellule avec un tampon PBS pré-refroidi pendant 1 à 2 fois, centrifuger et jetez le surnageant de la même manière, gardez la pastille cellulaire.

1.2. Pour les cellules suspendues: transférer directement les cellules dans un tube de centrifugeuse, centrifuge à 1000 g pendant 3-5 min, jetez le surnageant et conservez la granulée cellulaire; Ensuite, rincez le pastille de la cellule avec un tampon PBS pré-refroidi pendant 1 à 2 fois et la centrifuge de la même manière défausse le surnageant et sauvegardez la culotte cellulaire.

1.3. Pour les cellules de tissu: Coupez le tissu en petits morceaux autant que possible, sélectionnez la trypsine, la collagénase et d'autres enzymes digestives à digérer les pièces de tissu en fonction de la source du tissu et de filtrer avec un écran de 100 à 300 mailles pour obtenir une seule cellule. suspension; Après filtration, transférez la suspension cellulaire sur un tube de centrifuge, centrifuger à 1000 g pendant 3-5 min, jetez le surnageant et sauvegardez la pastille cellulaire; Puis rincer la pastille de cellule avec un tampon PBS pré-refroidi pendant 1 à 2 fois, centrifuger et jeter le surnageant de la même manière. Pellets cellulaires.

2. Fixation des échantillons de cellule

2.1. Ajouter 1 ml d'éthanol de 75% pré-refroidi sur de la glace sur les échantillons de pellets cellulaires collectés et soufflez doucement les cellules pour les faire au contact totalement;

2.2. Fixez les cellules à 4 ℃ pendant 30 minutes ou plus (généralement fixant pendant 2 h ou plus peut assurer l'effet de coloration, et la fixation pendant 12-24 h peut être plus efficace, ce qui peut améliorer l'effet de coloration).

2.3. Après avoir fixé pendant une certaine période de temps, centrifuger les cellules à 1000 g pendant 3-5 min, retirez l'éthanol fixatif et conservent la culotte de cellule;

2.4. Appuyez sur le bas du tube centrifuge pour disperser les cellules, remettre en suspension et lavez les cellules dans le tampon PBS, centrifuger à 1000 g pendant 3-5 min, jetez le surnageant pour collecter la granulée de la cellule;

3. Préparation et teinture du fluide de travail de teinture

3.1. Préparez la solution de travail de teinture selon le tableau suivant et évitez la lumière. La quantité de préparation peut être augmentée ou diminuée dans la même proportion selon les exigences d'utilisation (la solution de travail de teinture finie peut être stockée à 4 ° C en peu de temps, veuillez l'utiliser dans le même jour);


1PC échantillon

Échantillons 5 pcs

Échantillons de 10 pcs

Tampon

480 μl

2,4 ml

4,8 ml

Solution de coloration Pi (50 ×)

10 μL

50 μl

100 μL

Réactif de rnasea (50 ×)

10 μL

50 μl

100 μL

Capacité totale

500 μL

2,5 ml

5 ml

3.2. Appuyez sur le bas du tube centrifuge pour disperser les cellules précipitées à l'étape 2.4, puis ajoutez 500 μl de la solution de travail de coloration préparée, pipettant doucement pour disperser les cellules et mélanger avec la solution de travail de coloration;

3.3. Incuber à 37 ° C pendant 30 minutes dans l'obscurité, puis utilisez la cytométrie de flux de détection.

4. Détection de flux et analyse

Un cytomètre à flux a été utilisé pour détecter la fluorescence rouge à la longueur d'onde d'excitation de 488 nm, tout en détectant la diffusion de la lumière. Utilisez un logiciel d'analyse approprié pour l'analyse de contenu de l'ADN cellulaire et l'analyse de la diffusion de la lumière.

Remarques:

1. Les colorants fluorescents ont des problèmes de trempe de fluorescence, alors essayez d'éviter la lumière pendant l'utilisation et le stockage;

2. Avant l'expérience, il est recommandé de synchroniser le cycle de cellule afin d'éviter la grande différence répétitive causée par le cycle cellulaire différent;

3. La densité de plantation de cellules expérimentales ne doit pas être trop élevée ou trop faible pour éviter l'inhibition de contact ou la dépendance à la densité; 4. Lors de la manipulation de la solution de coloration PI, faites attention à la protection et évitez le contact direct avec le corps humain ou l'inhalation;

5. Veuillez porter un manteau de laboratoire et des gants jetables pendant le fonctionnement.

Le produit est à des fins de recherche scientifique uniquement, pas pour le diagnostic clinique!

G1700-50TRéactif -1 (1)téléchargerSlice 13Slice 12Slice 10Slice 14

Contact us

Liens rapides

catégorie de produit

Entrer en contact

 5ème étage, 22 bâtiment, Biopark, Gaoxin 2e route n ° 388, zone de développement de haute technologie de l'Est, Wuhan, Hubei, Chine 430079
 +86 (027) 5111 3188
Copyright © 2021 Wuhan Servicebio Technology Co., Ltd.