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Kit de détection de la viabilité de cellules CALCEIN AM (CCK-F)

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Le volume: 100t

  • G1609-100T
  • Servicebio

Description du produit

Information produit

Nom du produit

Chat. Non.

Spec.

Kit de détection de la viabilité de cellules CALCEIN AM (CCK-F)

G1609-100T

100t

G1609-500T

500t

Calcein am est basé sur la calceine (Calcein), introduisant un groupe acéométhoxyméthyl (AM). Le groupe AM masque non seulement la partie moléculaire de calcium chélatine de calcaire mais améliore également son hydrophobicité, il peut donc permettre à Calcein am de pénétrer facilement dans la membrane des cellules vivantes et est clivé dans la calcine par l'estériase endogène de la cellule. Calcein qui a perdu le groupe AM ne peut pas facilement passer à travers la membrane cellulaire et est ainsi conservé dans la cellule; De plus, la partie de la molécule de chélaille de calcium est exposée, permettant à la sonde de calcine de se lier à des ions calcium dans des cellules vivantes et d'émettre une forte fluorescence verte. Le manque d'estérase dans les cellules mortes n'autorise pas la calcine am d'être hydrolysée dans la calcine, de sorte que les cellules mortes ne peuvent pas être étiquetées. La calcine AM a une cytotoxicité faible et a peu d'effet sur les fonctions de cellules, telles que la prolifération cellulaire ou la chimiotaxie des lymphocytes. C'est une sonde fluorescente très appropriée pour la coloration des cellules vivantes.

Le kit de détection de la viabilité de la cellule CALCEIN AM est également appelé kit de comptage de fluorescence cellulaire (CCK-F), qui utilise une sonde fluorescente de calcine AM pour étiqueter des cellules vivantes pour évaluer la viabilité cellulaire, la toxicité et la prolifération. Kit de détection. Après l'optimisation et le débogage, ce kit a non seulement une sensibilité de détection élevée et une plage linéaire large, mais elle n'a également besoin que d'une courte période d'incubation pour compléter la détection de cellules. L'opération est simple, ne nécessite pas d'étiquetage radioisotope et ne nécessite pas de étapes telles que la dissolution de cristal, qui peut réduire les erreurs causées par des opérations expérimentales et améliorer la précision et la répétabilité.

Stockage et transport

Sac de glace (glace mouillée);

Conserver à -20 ° C. La solution de Calcein AM doit être stockée dans le noir et la congélation répétée et la dégrafante doit être évitée autant que possible; Il est valable 12 mois.

Liste de produits:

Chat. Non.

Description du produit

Le volume

G5051-100ML

Dumethyl sulfoxyde DMSO Note biochimique

100ml

Stockage et transport

Stockage et transport à la température ambiante, valable 2 ans.

Composant

Numéro de composant

Composant

G1609-100T

G1609-500T

G1609-1

CALCEIN AM Solution

10 μL

50 μl

G1609-2

Tampon de détection CCK-FD

10 ml

50 ml

Manuel

1

Étapes d'opération:

1. Préparation de la solution de travail de détection de calcine am:

Selon le montant de l'utilisation de 100 μL par puits de la plaque de 96 puits, reportez-vous au tableau suivant, mélangez la solution Calcein AM et la mémoire tampon de détection CCK-F proportionnée pour préparer la solution de travail de détection de calcine am.

Composant

10échantillons PCS

50échantillons PCS

100échantillons PCS

CALCEIN AM Solution

1 μL

5 μL

10 μL

Tampon de détection CCK-F

1 ml

5 ml

10 ml

2. Détection de cellules adhérentes:

Les étapes suivantes correspondent principalement au schéma de détection de plaque 96 puits et d'autres systèmes de plaque de puits doivent être ajustés en fonction de la situation.

une. Plaque d'ensemencement des cellules: semer uniformément les cellules dans une plaque de 96 puits à une certaine densité et appliquer des médicaments ou d'autres pré-traitements (la densité d'ensemencement est déterminée par des facteurs tels que la taille de la cellule, le taux de croissance, etc.);

b. (Facultatif) Lavage des cellules: aspirer le milieu de culture d'origine et le lavage 1 à 2 fois avec le tampon PBS (G4202 recommandé) pour réduire les interférences de sérum, de rouge de phénol ou de drogues sur les résultats expérimentaux;

c. Étiquetage de la sonde: après avoir retiré le tampon de milieu de culture cellulaire ou PBS, ajoutez une solution de travail de détection de 100 μl de calcine am et incubes à 37 ° C dans l'obscurité pendant 30 min;

une. (Facultatif) Incubation des cellules: Changez le support de culture cellulaire et continuez à incuber pendant 15-30 minutes pour vous assurer que la calcine am dans les cellules est complètement hydrolysée;

b. Détection de fluorescence: Utilisez un lecteur de microplaque pour la lecture de fluorescence, la longueur d'onde d'excitation maximale de la sonde de calcine AM est de 501 nm et la longueur d'onde d'émission maximale est de 521 nm. L'activité de la cellule est directement proportionnelle à l'intensité de la fluorescence. Selon des objectifs expérimentaux différents, les noyaux cellulaires peuvent être encore mis à la contretraités ou détectés par d'autres instruments (tels que le microscope de fluorescence).

1. Détection de la cellule de suspension:

une. Ensemencement des cellules: des cellules de semences uniformément dans une plaque de 24 puits à une certaine densité et appliquent des médicaments ou d'autres pré-traitements (la densité d'ensemencement est déterminée par des facteurs tels que la taille de la cellule, la vitesse de croissance, etc.);

b. (Facultatif) Lavage des cellules: Centrifuge à 1000 g pendant 3 à 5 minutes pour retirer le milieu d'origine et laver 1-2 fois avec le tampon PBS, à chaque fois que vous avez besoin de 1000 g centrifugation pendant 3 à 5 minutes pour réduire le sérum, le phénol rouge ou les médicaments interférences avec des résultats expérimentaux;

c. Étiquetage de la sonde: Après centrifugation à 1000 g pendant 3 à 5 minutes, retirez le tampon de milieu de culture cellulaire ou du PBS, ajoutez une quantité appropriée de solution de travail de détection de calcine am et incubé pendant 30 min à 37 ° C dans le noir;

ré. (Facultatif) Incubation des cellules: modifier le milieu de culture cellulaire et continuer à incuber pendant 15-30 minutes pour vous assurer que la calcine am dans les cellules est complètement hydrolysée;

e. Détection de fluorescence: Utilisez un lecteur de microplaque ou un cytomètre de flux pour la détection de fluorescence. La longueur d'onde d'excitation maximale de la sonde de Calcein AM est de 501 nm et la longueur d'onde d'émission maximale est de 521 nm. L'activité de la cellule est directement proportionnelle à l'intensité de la fluorescence. Selon des objectifs expérimentaux différents, les noyaux cellulaires peuvent être encore mis à la contretraités ou détectés avec d'autres instruments (tels que le microscope de fluorescence).

Remarques:

1. La solution CALCEIN AM est centrifugée pendant une courte période avant utilisation pour réduire la perte de réactif.

2. Évitez la congélation répétée et la décongélation de la solution de Calcein AM. Après avoir reçu le produit, il est recommandé de l'aliquoter de manière appropriée et de le stocker dans un récipient scellé à -20 ° C dans le noir.

3. Calcéine AM est instable dans une solution aqueuse. La solution de travail de détection de CALCEIN AM doit être préparée à une utilisation immédiate et il sera efficace dans les 24 heures.

4. En raison de différents états cellulaires, le temps d'incubation et la concentration de la solution de travail de détection de calcine am peuvent être ajustés en fonction de la situation.

5. Lors de l'utilisation d'un lecteur de microplaque pour mesurer l'intensité de la fluorescence, veuillez utiliser une plaque de culture de cellules noires.

6. Les colorants fluorescents ont des problèmes de trempe. Veuillez utiliser et les reposer de la lumière.

7. Pour votre santé et votre sécurité, veuillez porter des manteaux de laboratoire et des gants pendant le fonctionnement.

Ce produit est à des fins de recherche scientifique uniquement, pas pour le diagnostic clinique!

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