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Kit de détection de mycoplasma Méthode de chimiiluminescence pour la culture cellulaire

Spécification: 20T
État de disponibilité:
  • G1901-20T
  • Servicebio
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Description du produit

G1901-20T

Introduction:

Ce kit de test Mycoplasma est conçu en utilisant l'activité d'une enzyme unique dans la mycoplasme. Cette enzyme peut décomposer le substrat unique du réactif de détection de mycoplasma tout en convertissant ADP en ATP. La luciférase catalyse l'oxydation de la luciférine en présence d'ATP et émettant de la bioluminescence, qui peut être mesurée par un luminomètre pour refléter la présence de contamination de mycoplasme dans l'échantillon à tester. L'ensemble du processus de détection est simple à utiliser, seulement deux étapes et prend environ 15 minutes. Cette méthode a une sensibilité élevée et détecte la mycoplasme avec une activité biologique réelle. Le résultat de détection est donc plus précis que la méthode PCR.

Stockage et transport

Transport avec glace humide; stocker à -20 ° C et stocker le réactif de détection de mycoplasma A dans le noir; La période de validité est de 12 mois.

Pas

1. Prendre une quantité appropriée (1 ml suffise) pour cultiver le surnageant cellulaire pendant 3 à 6 jours et centrifuger à 400 g pendant 3 min pour éliminer une petite quantité de cellules flottantes ou de débris. Prenez le surnageant pour la détection immédiate ou conservez-la à 4 ° C pour la détection dans une semaine ou -80 pour tester dans un délai d'un an;

2. Équilibrer tous les réactifs de test et tester des échantillons à la température ambiante, la température la plus appropriée est de 20-25;

3. Ajoutez 50 μl de l'échantillon à tester et une commande négative (telle que de l'eau stérile ou du PBS) à une plaque à essai de 96 puits (plaque non transparente, une carte blanche à 96 puits spéciale est recommandée);

4. Ajoutez 50 μl de réactif de détection de mycoplasma A, mélangez doucement pour éviter les bulles d'air et stockez à la température ambiante (20-25 ° C) dans l'obscurité pendant 5 minutes. Ensuite, utilisez un lecteur de microplaque avec la détection de chimiiluminescence pour effectuer la détection de la chimioluminescence et le compteur se lit comme A. (Veuillez ajuster les paramètres correspondants correctement en fonction de la sensibilité de l'instrument, le temps de détection de chaque trou est généralement de 0,25-1.);

5. Ajoutez 50 μl de réactif de détection de mycoplasma B, mélangez doucement pour éviter les bulles d'air et stockez à la température ambiante (20-25 ° C) dans l'obscurité pendant 10 minutes. Ensuite, utilisez un lecteur de microplaque avec la détection de chimiiluminescence pour effectuer la détection de chimiiluminescence et le compteur se lit comme B. (Remarque: suivez Strictement le test 10 min après l'ajout de réactif de détection Mycoplasma B et ne doit pas être avancé ou retardé, sinon elle affectera le jugement des résultats);

6. Calculez le rapport (ratio) = valeur de lecture B / Valeur de lecture A.

A. Si B / A> 1.1, cela signifie qu'il existe une contamination de mycoplasme dans la culture cellulaire;

B. Si B / A <0,9, cela signifie qu'il n'y a pas de contamination de mycoplasme dans la culture cellulaire;

C. Si le rapport B / A est compris entre 0,9 et 1, il est recommandé de continuer à cultiver les cellules pendant 24 à 48 h, puis de tester à nouveau pour déterminer s'il existe une contamination de mycoplasme. Si le rapport B / A est toujours compris entre 0,9 et 1, la culture cellulaire est exempte de contamination de mycoplasme et est négative de mycoplasme.

G1901-20T

Précautions

1. Le réactif de détection de mycoplasme a contient une luciférase, qui sera progressivement inactivé par le congélation répétée et la décongélation. Il est recommandé que les aliquotes soient correctement stockées après la première décongélation et que le conteneur Aliquot devrait être propre et sans pollution.

2. Il est fortement recommandé d'utiliser une plaque blanche ou noire opaque à 96 puits pour les tests. L'utilisation d'une plaque transparente transparente ordinaire 96 provoquera des interférences avec des puits de test adjacents.

3. La surface de la peau humaine est riche en ATP. Veuillez porter des gants et des masques expérimentaux lorsque vous testez. D'autres consommables devraient également être propres et sans pollution afin de prévenir l'introduction de la pollution de l'ATP provenant de sources externes.

4. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des manteaux de laboratoire et des gants jetables pour fonctionner.

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