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Kit de détection quantitative de protéines BCA

  • G2026-1000T

Description du produit

Présentation du produit:

Il existe deux méthodes les plus couramment utilisées pour la détection quantitative de la concentration en protéines: Bradford et BCA. Le principe de base de la détection quantitative des protéines par méthode BCA est basé sur la réaction du biuret, c'est-à-dire que la CU2 + est réduite dans des conditions alcalines Cu +, puis chélatant avec BCA (acide bicinchonique, agent chromogène). Chaque molécule chélate un Cu, pour former un complexe violet soluble dans l'eau. La substance a la valeur d'absorption la plus élevée à 562 nm et la profondeur de couleur est proportionnelle à la concentration en protéines, elle peut donc être utilisée pour la détection quantitative de protéines, la concentration en protéines a une bonne relation linéaire dans la plage de 50 à 2 000 μg / mL.

Cette méthode n'est pas affectée par les substances chimiques dans la plupart des échantillons, compatible avec de fortes concentrations de dissolvant à l'échelle, SDS, avec des concentrations allant jusqu'à 5% compris 5% de Triton X-100, 5% de la Tween-20, entre elles - 20,60,80, etc. . Mais les agents chélatéraux et les concentrations élevées d'agents réducteurs affectent les résultats, garantissant aucun EGTA, dans des échantillons de concentration EDTA inférieure à 10 mm, DTT inférieur à 1 mm, le β-mercaptoéthanol est inférieur à 1 mm. Si l'échantillon contient un agent chélatant ou un agent réducteur, considérez nos autres produits Kit de détection quantitative de protéines G2001 Bradford.

Contenu du colis:

Chat. Non.

Description du produit

Le volume

G2026

Kit de détection quantitative de protéines BCA

1000t

Composants:

Numéro de composant

Composant

G2026-1000T

G2026-1

BCA Réactif

2 × 100 ml

G2026-2

Solution de sulfate de cuivre

5 × 1,2 ml

G2026-3

BSA

5 × 25 mg

G2026-4

Solution BSA

5 × 1,5 ml

Condition de stockage:

Toute la trousse de réactifs peut être transportée à la température ambiante; La norme protéique (BSA) est stockée à 4, valable 12 mois. Après la solution standard des protéines, stocké à -20 et utilisé dans les 6 mois. Les réactifs restants sont stockés à la température ambiante et valables 12 mois.

Usage:

1. Solution de réserve standard de la protéine: une solution de préparation standard de protéines de 1 ml a été ajoutée au tube standard de la protéine BSA et une norme de protéine de 25 mg a été complètement dissoute, c'est-à-dire la solution de réserve standard de protéines avec une concentration de 25 mg / ml. La solution standard de protéines peut être préservée pendant une longue période.

2. Préparation de la solution de travail standard de protéines: prenez la quantité appropriée de la solution de réserve standard de la protéine de 25 mg / mL, diluant 50times avec une solution saline ou une solution saline normale, obtenez la solution de travail standard de protéines avec une concentration finale de 0,5 mg / ml. Faites attention à la dilution selon une méthode de 10 fois de gradient pour assurer une dilution précise.

3. Courbe standard (méthode d'étiquetage d'enzyme): La solution de travail standard de protéines a été ajoutée à 96 plaque de puits selon 0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20cul respectivement, puis ajouté 20, 19, 18, 16 , 12, 8, 4, 0UL avec du PBS ou une solution saline normale, puis la solution de travail à gradient a été reconstituée à 20UL. Puis la courbe de gradient de la concentration en protéines de 0, 25, 50, 100, 200, 300, 400, 500ug / ml a été obtenue.

4. Préparation des échantillons à tester: les échantillons de protéines à tester sont correctement dilués (la concentration en protéines de l'échantillon peut être détectée dans la courbe standard afin de garantir que les résultats du test sont crédibles) et ajoutés à la plaque de 96 puits selon le montant de 20 μL par échantillon. L'échantillon à tester et la norme protéique ont été dilués avec la même solution.

5. Préparation de la solution de travail chromogénique BCA: la solution de sulfate de bca réactif et de cuivre a été mélangée uniformément selon le rapport de volume de 50: 1 pour obtenir la solution de travail chromogénique BCA. Le fluide de travail chromogénique BCA peut être stocké à la température ambiante pendant 24 h. Chaque échantillon à tester a besoin de 200 μl, suggéré d'être préparé à la demande d'éviter les déchets.

6. Test: Ajouter 200 μL, de fluide de travail chromogénique BCA au trou d'échantillon de courbe standard et à un trou d'échantillon à tester bien mélanger (la plaque 96 de puits peut être placée sur un oscillateur pendant 30 secondes), 37 après 30 minutes de réaction, à l'aide de courbe standard 0 En tant que référence, colorimétrie à 562 nm longueur d'onde, enregistrez l'absorbance de chaque trou. (Remarque: la réaction peut également être à la température ambiante 2 h, ou 60 réaction de la température de 30 min. Si la concentration en protéines est faible, elle est recommandée à 60 réactions)

7. Calcul: La courbe standard est dessinée avec une teneur en protéines à gradient (μg / ml) en tant que coordonnée horizontale et absorbation en tant que coordonnée verticale. Selon l'absorptivité de l'échantillon, la concentration en protéines (μg / ml) de l'échantillon à tester dans le trou correspondant peut être trouvée sur la courbe standard, puis multipliée par le multiple de dilution de l'échantillon est la concentration en protéines réelle de l'échantillon à tester.

Remarques:

1. La détection quantitative de protéines BCA est considérablement affectée par la température et la durée, la valeur d'absorbance changera avec la prolongation du temps ou de l'augmentation de la température. Si le temps et la température de la réaction de couleur ne peuvent pas être contrôlés avec précision, il est suggéré qu'une courbe standard doit être faite pour chaque détermination.

2. Lors de la préparation de la solution de réserve standard de protéines, il est nécessaire de garantir une dissolution suffisante. Lorsque vous diluant la solution de fonctionnement standard de protéines, il est recommandé de diluer 10 fois de dégradé, de ne pas diluer 50 fois à la fois, de manière à éviter une erreur importante.

3. Afin de garantir la quantification précise de la protéine, il est préférable de choisir la même solution tampon d'extraction des échantillons et de dilution de la norme de protéines, ce qui correspond aux conditions de détection. Si le tampon lui-même a une valeur de contexte élevée, il est recommandé d'utiliser d'autres méthodes.

4. Veuillez porter des vêtements de laboratoire et des gants jetables pendant le fonctionnement.

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