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Kit de synthèse de l'ADNc Sweescript RT II (avec dissolvant GDNA)

  • G3333-50

Description du produit

Présentation du produit:

Ce produit utilise la transcriptase inverse mutante modifiée pour synthétiser le premier brin d'ADNc avec l'ARN total ou l'ARNm comme modèle pour une transcription inverse efficace. Le kit contient tous les réactifs nécessaires pour synthétiser le premier brin d'ADNc de haute qualité et fournit deux types d'amorces de synthèse d'ADNc à choisir: l'apprêt hexamère aléatoire et l'apprêt oligo (DT) 18 amorce synthétisée des produits d'ADNc à échelle pouvant être directement. utilisé pour les réactions PCR ou QPCR suivantes. SweScript RT II (transcriptase inverse) est une transcriptase inverse mutante basée sur la transcriptase inverse M-MLV et obtenue par le dépistage évolutif in vitro. Swescript RT II n'a pas d'activité de RNase H. La dégradation de l'ARN dans le gabarit de l'hybridation ADN / ARN lors de la première réaction de synthèse de l'ADNc de brin a été évitée, de manière à assurer la quantité et la longueur de la première synthèse de l'ADNc de brin. Par rapport à l'enzyme de type sauvage et à la première génération de Swescript RT I, la deuxième génération de SweScript RT II a encore amélioré la stabilité thermique et l'efficacité de la synthèse de l'ADNc. Il peut synthétiser efficacement l'ADNc dans la plage de 42 à 65 et compléter la réaction de transcription inverse dès 5 min, particulièrement appropriée pour la transcription inverse de l'ARN à structure complexe.

Le kit fournit également un réactif de dissolvant GDNA, qui peut rapidement éliminer la contamination de l'ADN génomique résiduelle des modèles d'ARN avant les étapes de la transcription inverse, améliorant la fiabilité des résultats expérimentaux et simplifiant la conception des amorces QPCR sans la nécessité de la conception d'amorce croisée.

Contenu du colis:

Chat. Non.

Description du produit

Le volume

G3333

Kit de synthèse de l'ADNc Sweescript RT II (avec dissolvant GDNA)

50RXNS / 100RXNS

Composants:

Numéro de composant

Composant

G3333-50

G3333-100

G3333-1

Mélange d'enzyme Sweescript RT IIa

50ul

100UL

G3333-2

Tampon de réaction 5xb

Fusionné

400L

G3333-3

Oligo (dt) 18 amorce (100um)

50ul

100UL

G3333-4

Primer Hexamer aléatoire (100um)

50ul

100UL

G3333-5

Remover de la GDNA

50ul

100UL

G3333-6

10x tampon de dissolvant GDNA

50ul

100UL

G3333-7

Eau sans nucléase

1ml

1ml

Manuel

1 pc

1 pc

a: Avec inhibiteur de la RNase

b: Avec mélange DNTP & mg² +

Condition de stockage:

Transport de sac de glace humide; Stocké à -20 température, valable 12 mois.

Usage:

1. Élimination du génome

(1) Le gabarit d'ARN et l'eau sans nucléase ont été mis sur la glace à fondre pour une utilisation ultérieure;

(2) Réaction d'élimination du génome (système de réaction 10UL recommandé):

Composant

Le volume

10x tampon de dissolvant GDNA

1ul

Remover de la GDNA

1l

ARN total / ARNm

0,1 ng-5ug / 10 pg-0.5ug

Eau sans nucléase

Ajouter à 10l

(3) mélanger doucement et centrifuger;

(4) incuber à 37 ℃ pendant 2 min, puis mettre sur la glace pour une utilisation ultérieure;

2. Synthèse de la première ADNc de brins

(1) la préparation du système de réaction de la transcription inverse (système de réaction 20UL est recommandé);

Composant

Le volume

À l'étape précédente, le génome a éliminé le fluide réactionnel

10ul

Tampon de réaction 5x

4UL

Oligo (dt) 18 amorce (100um)

1l

ou primaire hexamère aléatoire (100um)

ou 1UL

ou apprêt spécifique au gène (2UM)

ou 1UL

Mélange d'enzyme Sweescript RT II

1l

Eau sans nucléase

Ajouter à 20ul

Remarque: Pour les modèles de GC élevés ou complexes, la gabarate d'ARN, les amorces de transcription inverse et l'eau sans nucrenase peuvent être mélangées à l'avance, puis refroidies sur glace rapidement après avoir été maintenue à 65 ° C pendant 5 min. Et puis vous ajoutez les autres composants.

(2) mélanger doucement et centrifuger;

(3) Réglage du programme de transcription inverse:

Température

Time

25 un

5 min

55 ℃ b

5-15 min

85

5 s

A: Par exemple, l'apprêt hexamer aléatoire est sélectionné et incubé à 25 pendant 5 min, puis la réaction ultérieure est effectuée. Si vous choisissez d'utiliser l'amorce OLIGO (DT) 18 ou un apprêt spécifique au gène, vous pouvez réagir directement à 55 ° C.

B: Pour des modèles de GC élevés ou complexes, la température de la transcription inverse peut être élevée à 65 ° C.

Remarques:

1. Veuillez porter des gants jetables pendant le fonctionnement pour éviter la contamination de la RNase.

2. Les produits de transcription inverse peuvent être stockés à -20 pendant une courte période. Si le stockage à long terme est nécessaire, il est recommandé de les stocker à -80 après l'emballage pour éviter les cycles répétés de gel.

3. Si le modèle est d'origine eucaryote, il est recommandé de sélectionner une amorce d'oligo (dt) 18 et de la pair avec la queue de 3 'poly une ARNm eucaryote pour obtenir le rendement le plus élevé d'ADNc de longueur maximale.

4. Pour la transcription inverse de l'ARN procaryote, l'apprêt hexamer aléatoire ou l'apprêt spécifique au gène doit être utilisé.

5. L'apprêt hexamère aléatoire a une applicabilité large et convient à l'ARNm, à l'ARNr, à l'ARNT, aux petits modèles d'ARN et de LNCRNA.

6. Si la transcription inverse est suivie par le test QPCR, l'apprêt à oligo (DT) 18 et l'apprêt d'hexamer aléatoire peut être mélangé pour rendre l'efficacité de la synthèse de l'ADNc dans toutes les régions d'ARNm, ce qui contribue à améliorer l'authenticité et la répétabilité des résultats quantitatifs.

7. Si les amorces QPCR ultérieures sont conçues sur des exons, l'étape de retrait du génome peut être omise.

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