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Kit de transcription à rendement élevé T7 pour la synthèse d'ARN

Spécification: 50T
  • G3021-50T
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Description du produit

G3021-50T

Présentation du produit

Ce kit utilise la polymérase de T7 ARN pour contenir un ADN plasmide linéarisé, un produit PCR ou un ADN synthétique contenant un promoteur T7, et la synthèse de l'ARN est transcrite in vitro. Ce kit optimise l'ARN dans le système de réaction transcriptionnelle in vitro, qui peut simplement obtenir rapidement un grand nombre de molécules d'ARN. Si le nucléotide modifié est ajouté dans le substrat, le nucléotide réactif peut être préparé et l'étiquette d'ARN peut être préparée. Ce kit est principalement utilisé dans la traduction in vitro, l'expérience de protection contre la RNase, l'étiquette de sonde hybride, le cisaillement de l'ARN et d'autres expériences biologiques. Une entrée de modèle de 1 μg dans le système de réaction peut produire une ARN supérieure à 100 μg, adaptée à la préparation d'ARN de longueur 100-5000 NT.

Stockage et transport

Transport avec glace humide; Stockage à -20 ° C, valable 12 mois.

Pas

1. Préparation du modèle:

une. Utilisez le plasmide du promoteur T7 comme modèle: afin d'obtenir l'ARN d'une longueur spécifique, le gabarit plasmide doit être complètement linéarisé (il doit être purifié comme un modèle) et le plasmide linéarisé doit s'assurer que les deux brins sont extrémités émoussées ou 5'overhangs (évitez les 3'overhangs apparaissent), la quantité de modèle recommandée pour chaque réaction est de 1 μg;

b. Utilisez le produit PCR du promoteur T7 ou le fragment d'ADN synthétisé sous forme de modèle: lorsque la PCR amplifie le modèle, ajoutez le promoteur T7 (5'-TaataCgactCacTaTaggg-3 ') à 5'end de l'amorce Strand non codant. Les produits PCR peuvent être utilisés directement en tant que modèles de transcription sans purification, mais plus d'ARN sera produite après la purification. Le montant du gabarit recommandé pour chaque réaction est d'environ 0,5 μg.

2. Réaction de transcription: selon le système de réaction recommandé dans la table, ajoutez divers réactifs au tube EP propre, bien mélanger et réagissez à 37 ° C pendant 2 heures. (Si la synthèse de l'ARN est inférieure à 300 NT, il est recommandé d'étendre le temps de réaction à 4 h ou plus).

Composant

Le volume

Modèle

0,5-1 μg

5 × tampon de réaction de transcription T7

4 μL

25 mm NTP MIX

2 μL

Mélange d'enzyme de transcription de l'ARN T7

4 μL

Eau sans nucléase

À 20 μL

3. Une fois la réaction terminée, ajoutez 1 μL Dnase I au système et réagissez à 37 ° C pendant 15 minutes pour digérer la gabine ADN transcrite.

4. L'ARN synthétisé peut être utilisé dans des expériences en aval après analyse et purification de l'électrophorèse.

5. Quantification et détection des produits de transcription: la concentration d'ARN peut être déterminée par la méthode d'absorption des ultraviolets (les nucléotides libres affecteront la précision de la quantification, les produits ARN doivent être purifiés); La détection d'électrophorèse est recommandée pour utiliser une détection de gel d'agarose de 1% de formaldéhyde, une solution d'électrophorèse est de 1 × mops tampon (10 × mops tampon: 0,4 m vestiges, pH 7,0, 0,1 m d'acétate de sodium, 10 mM EDTA). Méthode de préparation du gel: peser 0,5 g d'agarose en 36 ml d'eau sans rnase, de chaleur à fondre et ajoutez 5 ml 10 × mops tampon. Lorsque la solution est refroidie à pas chaud, ajoutez 9 ml de solution de formaldéhyde (37%), mélangez bien et verser la colle. Lors de la détection d'électrophorèse, mélanger une quantité appropriée d'ARN avec tampon de chargement d'ARN, incuber à 70 ° C pendant 10 minutes, puis le bain de glace pendant 2 minutes et repérez tous les échantillons. Après l'électrophorèse, tache avec EB ou SERRED (G3606) pour l'observation.

Précautions

1. La surface de la peau humaine est riche en RNase. S'il vous plaît porter des gants expérimentaux et des masques lors de l'expérimentation. Les consommables expérimentaux sont stériles et sans enzyme d'empêcher la contamination de la RNase.

2. Si vous devez préparer l'ARN étiqueté, veuillez remplacer le mélange NTP dans le kit.

3. La longueur de la transcription du modèle de commande dans le kit est de 500 NT.

4. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des manteaux de laboratoire et des gants jetables pour fonctionner.

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