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MYCOPLASMA DÉTECTION Méthode PCR pour la culture cellulaire

Spécification: 50T
  • G1900-50T
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Description du produit

G1900-50T

Introduction:

La contamination de la mycoplasme peut entraîner des effets indésirables sur tous les aspects des cellules et est devenu un problème très apprécié dans la culture cellulaire. Par conséquent, il est très nécessaire de mener des tests de contamination mycoplasma réguliers. Ce kit de test Mycoplasma adopte la méthode PCR pour détecter spécifiquement la contamination de la mycoplasme dans divers matériaux biologiques cellulaires de culture (tels que la culture cellulaire, les sécrétions d'animaux de laboratoire, le sérum animal, etc.). Les amorces mélangées utilisées dans le kit sont des amorces spécifiques conçues pour les régions conservées de la séquence d'ARRN 16S de Mycoplasma 16S. Le fluide de la culture cellulaire peut être utilisé directement sous forme de modèle PCR pour amplifier spécifiquement l'ADN Mycoplasma avec le mélange de PCR mycoplasma correspondant (2 ×), l'ensemble du processus peut être complété en 2 heures. Ce kit a une sensibilité de détection élevée et peut détecter aussi peu que 20 copies de mycoplasme.

Stockage et transport

Sac de glace (glace mouillée); -20 ° C préservation, valable 12 mois.

Numéro de composant

Composant

G1900-50T

G1900-1

MYCOPLASMA PCR MIX (2 ×)

1 ml

G1900-2

Mélange mycoplasma

100 μL

G1900-3

Contrôle positif

50 μl

G1900-4

Mycoplasma eau libre

1 ml

Manuel

1 份

Pas

1. Préparation des échantillons: Prenez une quantité appropriée du surnageant de la culture cellulaire à tester dans un tube de PCR propre, chauffez-la à 95 ° C pendant 5 min avec une machine PCR en tant que modèle. Les échantillons de sérums peuvent être dilués avec de l'eau libre Mycoplasma et une quantité appropriée de l'échantillon peut être prise dans un tube PCR propre et traité thermiquement avec une machine PCR à 95 ° C pendant 5 min en tant que modèle;

2. Préparation du système PCR: Chaque expérience doit configurer un contrôle négatif (remplacer 1 μL de l'échantillon à tester avec la même quantité d'eau libre Mycoplasma) et un contrôle positif (ajouter 0,5 μl de la commande positive à l'échantillon à être testé sous forme de modèle), portez des masques jetables et des gants lors de l'expérience et utilisez avec précaution pour éviter toute opération inappropriée d'introduire une contamination de mycoplasme exogène;

Composant

Le volume

Modèle

1 μL

Mélange mycoplasma

2 μL

MYCOPLASMA PCR MIX (2 ×)

10 μL

Mycoplasma eau libre

À 20 μL

3. Paramètres du programme PCR:

Étape

Température

Time

Cycles

Dénaturation initiale

98

2 min

1

Dénaturation

98

20 s

30

Recuation

56

25 s

Extension

72

10 s

Extension finale

72

5 min

1

Tenir

4-16

Pour toujours


4. Électrophorèse sur gel: Prenez 10 μl de produit PCR et utilisez un gel d'agarose à 1% pour la détection d'électrophorèse;

5. Analyse des résultats: chaque expérience confirme la contamination de Mycoplasma de l'échantillon en comparant les résultats du test avec le contrôle négatif et le contrôle positif. La taille de la bande positive est d'environ 500 pb. S'il y a une bande dans le résultat du test de contrôle négatif, il est très probable qu'il existe une contamination dans le système PCR, et il est recommandé de ré-expérimenter pour confirmer le résultat. Si nécessaire, les produits PCR peuvent également être systématiquement séquencés pour déterminer l'espèce de mycoplasme spécifique.

Précautions

1. Ce kit peut détecter m.orale, m.arginini, m.bovis, m.fermentas, m.gallisepticum, M.Hominis, m.pirum, ureaplasma spp, m.hyorhinis, m.pneumoniae, a.laidlawii, etc. . Au moins 11 espèces de mycoplasma sont contaminées.

2. Talez complètement et mélangez tous les réactifs sur la glace avant utilisation et stockez à -20 ° C après utilisation.

3. Un contrôle négatif et un contrôle positif doivent être définis pour chaque expérience. Le groupe expérimental recommande de définir un exemple de gradient de modèle.

4. Vous devez porter un masque pendant l'opération et suivre strictement les normes d'exploitation PCR pour empêcher l'introduction de la pollution externe d'affecter les résultats expérimentaux.

5. Afin d'assurer la fiabilité et la stabilité des expériences cellulaires, il est recommandé de procéder à des tests de contamination réguliers de la mycoplasme.

6. Pour votre sécurité et votre santé, veuillez porter des manteaux de laboratoire et des gants jetables pour l'opération.v

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