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Réactif de biologie moléculaire liquide d'extraction d'ARN

  • G3013-100ml

Description du produit

Présentation du produit:

Cette solution d'extraction d'ARN produit est un réactif utilisé pour une extraction totale de l'ARN des cellules ou des tissus. Il utilise l'isothiocyanate de guanidine et d'autres substances pour lyser rapidement les cellules pour libérer l'ARN et l'extraire en phénol. Dans le même temps, il contient des inhibiteurs de la RNASE pour prévenir la dégradation de l'ARN et maintenir l'intégrité de l'ARN.

Contenu du colis:

Chat. Non.

Description du produit

Le volume

G3013

Solution d'extraction d'ARN

100ml

Condition de stockage:

Transport de sac de glace humide; Stocké à 4 températures, valables 12 mois.

Usage:

LF autoparie, alcool isopropylique, eau de DEPC, éthanol à 75% (préparation de l'eau de DEPC).

1. Lyse d'un échantillon de cellule ou de tissu

Cellules adhérées: éliminer le milieu de culture cellulaire, les cellules propres avec une quantité appropriée de PBS pré-refroidis et déplacez le PBS autant que possible. Ajouter un extrait d'ARN à la plaque de puits selon la quantité d'extrait d'ARN de 1 ml par plaque 6-puits et extrait d'ARN de 0,5 ml par plaque de 12 puits, agitez doucement pour que les cellules au fond de la plaque se maintiennent complètement l'extrait d'ARN, Soufflez les cellules avec pistolet à pipette pour rendre les cellules lyse, puis transférer au tube de la centrifugeuse et laissez-vous reposer à la température ambiante pendant 5 min.

Suspendez les cellules: les cellules ont été collectées par centrifugation et le surnageant a été retiré autant que possible. Un extrait d'ARN de 1 ml a été ajouté à toutes les cellules 1-10x106 et les cellules ont été soufflées plusieurs fois avec pistolet à pique-pipette au clivage, puis les cellules ont été laissées debout à la température ambiante pendant 5 minutes.

Échantillon de tissu: couper le tissu en petits morceaux et les mettre dans un homogénéisateur pré-refroidi. Ajoutez un extrait d'ARN de 1 ml pour 100 mg de tissu et homogénéisez jusqu'à ce qu'aucun tissu ne soit visible. Les fragments de tissus ont été séparés par centrifugation à 12 000 g à 4 ° C pendant 10 minutes et le surnageant a été transféré dans un nouveau tube centrifuge.

2. Extraction d'ARN: 380UL LF a été ajoutée à chaque extrait d'ARN de 1 ml, puis le tube de centrifuge a été secoué violemment pendant 15s par mixage au tourbillon ou à l'envers et laissé à 3min à la température ambiante.

3. Centrifugation: Centrifugeuse à 12 000 g à 4 ° C pendant 15 min, transférer soigneusement la phase aqueuse supérieure incolore sur le nouveau tube centrifuge et absorber 500-550UL par ml d'extrait.

4. ARN précipité: l'isopropanol 550UL a été ajouté au tube d'extrait de phase aqueuse recueillis ci-dessus, mélangé légèrement à l'envers pendant plusieurs fois et précipité à -20 pendant 15 minutes.

5. Centrification: centrifugée à 4 ° C pendant 10 minutes à 12 000 g, les précipitations blanches étaient visibles au fond du tube, qui était une ARN totale et le surnageant a été rejeté.

6. Lavage: ajoutez 1 ml à 75% d'éthanol et mélangez-le à l'envers. Après centrifugation à 12 000 g pendant 5 minutes à 4, le surnageant a été mis au rebut puis centrifugé brièvement à une vitesse élevée (5 000 g pendant 3-5s). Le liquide a été soigneusement aspiré avec une tête de micro-aspiration.

7. Dissolution de l'ARN: le tube centrifuge avec une précipitation d'ARN a été laissé ouvert pendant 3 à 5 minutes. Une fois que l'ARN était légèrement séché, 20UL DePC Water a été ajouté pour rendre l'ARN complètement dissous, ce qui pourrait être utilisé pour la détection de concentration et les expériences de suivi. Veillez à ne pas sécher l'ARN trop, sinon il sera difficile de dissoudre et affectera le ratio A260 / 280.

Remarques:

1. Tous les tuyaux de pipette et les tubes de centrifugeuse doivent être exempts de contamination de la RNase. Vous pouvez acheter des consommables sans enzyme stériles de notre société.

2. Ce réactif contient de la guanidine isothiocyanate et du phénol retenue. Évitez le contact avec la peau ou l'inhalation.

3. Veuillez porter des vêtements de laboratoire et des gants jetables.

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