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Solution de tampon de lyse IP 100 ml utilisée pour lyser les tissus de cellules pour préparer des échantillons de protéines

  • G2038-100ML

Description du produit

Présentation du produit

Le lysat IP est un lysat qui lyse des cellules ou des tissus pour préparer des échantillons de protéines dans des conditions non dénaturantes. Les échantillons de protéines obtenus par des tissus ou des cellules de lysage avec cette solution de lyse peuvent être utilisés dans la page, Blot occidental, immunoprécipitation (précipitations d'immunol, IP), co-immunoprécipitation (co-IP), puce (chromatin immunopre-cipitation) et expériences d'ELISA.

Les principaux composants de ce produit sont de 25 mm Tris-HCl, NaCl de 150 mM, 1 mM EDTA, 1% NP-40 et 5% Triton X-100. Il peut être appliqué aux tissus animaux ou végétaux et aux échantillons de cellules, ainsi que des échantillons fongiques ou bactériens.

Instructions

Apportez votre propre inhibiteur de protéase. Les inhibiteurs de la protéase doivent être ajoutés au lysat IP avant utilisation, et G2006, G2007, G2008, etc., sont recommandés pour prévenir la dégradation des protéines. La solution de lyse IP mentionnée dans les méthodes d'utilisation suivantes signifie que tous les inhibiteurs de la protéase ont été ajoutés.

Pour les échantillons de tissus:

1. Les pièces de tissus sont lavées avec du PBS pré-refroidi (G4202 recommandé) pour éliminer les taches de sang, coupées en petits morceaux et placées dans un homogénéisateur.

2. Ajoutez 10 fois le volume tissulaire Tampon de lyse IP Homene à basse température (Recommandez la meuleuse de tissus à grande vitesse KZ-III-F et KZ-III-FP de manière indépendante et produite par ServiceBio). Notez que la quantité de lysate IP utilisée peut être ajoutée sur un rapport d'environ 50 mg de tissu à 1 ml de lysat. Si la teneur en protéines tissulaires est faible, la quantité de lysate peut être réduite pour augmenter la concentration en protéines dans la solution d'extrait de brut.

3. Transférez l'homogénéat vers un tube de 1,5 ml de centrifuge et secouez. Dans le bain de glace pendant 30 minutes, Pipette à plusieurs reprises toutes les 10 minutes pour s'assurer que les cellules tissulaires sont complètement lysées;

4. Centrifuge à 12 000 g pendant 5 min, et collectez le surnageant, qui est la solution de protéine totale.

Pour des échantillons de cellules adhérentes:

1. Lavez les cellules 2 à 3 fois avec du PBS et aspirez soigneusement le liquide restant pour la dernière fois.

2. Selon le rapport de 250 μl de lysat pour les cellules dans chaque puits de la plaque à 6 puits, pipet le lysat IP dans la plaque de culture de la cellule et la bouteille, et secouez la plaque et la bouteille à plusieurs reprises pour que le lysat contacte pleinement les cellules pour 3-5 min.

3. Grattez les cellules avec un grattoir de cellule et collectez-les dans un tube centrifuge.

4. Centrifuge à 12 000 g pendant 5 min, et collectez le surnageant, qui est la solution de protéine totale.

Pour échantillons de cellules de suspension:

1. Recueillir des cellules par centrifugation.

2. Mélangez le liquide de la cellule avec le tampon de lyse IP sur le rapport de 250 μl de tampon de lyse par puits de la plaque à 6 puits et secouez.

3. Dans un bain de glace pendant 30 minutes, pipette plusieurs fois toutes les 10 minutes au cours de laquelle les cellules sont complètement lysées.

4. Centrifuge à 12 000 g pendant 5 min, et collectez le surnageant, qui est la solution de protéine totale.

Pour des échantillons bactériens ou fongiques:

1. Prenez 1 ml de suspension bactérienne, centrifugeuse pour retirer le surnageant, lavez une fois avec du PBS pour retirer complètement le liquide. Vortex pour disperser autant que possible les bactéries.

2. Ajoutez 100-200 μl de tampon de lyse IP et de vortex doucement pour mélanger soigneusement les bactéries et le tampon de lyse.

3. Dans un bain de glace pendant 10 minutes, pipette plusieurs fois toutes les 2 minutes pour assurer une lyse complète des bactéries.

4. Centrifuger à 12 000 g pendant 5 min, et récupérez le surnageant, qui est la solution de protéine totale.


Précautions

1. Les tissus ou les cellules peuvent sembler collants lorsqu'ils sont lysés. Il peut être pipetté de manière répétée ou vortexée jusqu'à ce qu'il soit liquide. S'il a été plus épais, vous pouvez ajouter une quantité appropriée de solution de lyse.

2. Ce réactif ne contient pas d'inhibiteurs de protéase, vous devez préparer vos propres inhibiteurs de protéase et les ajouter avant utilisation. Il est recommandé d'utiliser le G2006, G2007, G2008 de notre société et d'autres inhibiteurs de protéase connexes.

3. La solution de protéine totale obtenue par lyse de ce produit est compatible avec le kit de détection quantitatif de la protéine BCA (G2026) de notre société.

4. Veuillez porter un manteau de laboratoire et des gants jetables pendant le fonctionnement.


G2038-100ML

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